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经穴输氧对大鼠颅脑损伤后超氧化物岐化酶丙二醛含量影响实验探究
经穴输氧对大鼠颅脑损伤后超氧化物岐化酶丙二醛含量影响实验探究摘要:目的:探讨经穴输氧治疗大鼠颅脑损伤的作用机制。方法:SD大鼠50只被随机分为正常组、假损伤对照组、电针组(取百会、足三里、阳陵泉、三阴交等穴电针治疗)、常规治疗组(给予仙台合剂4.17L/g)、经穴输氧组(将氧气按0.1L/min输入穴位)5组。后3组大鼠制备脑损伤模型。各组除给予常规治疗外进行对应治疗7天后活杀动物取双侧脑组织,检测脑组织超氧化物岐化酶、丙二醛含量变化,并进行脑组织病理观察。结果:各治疗组SOD含量低于正常对照组(P0.05),经穴输氧组高于各治疗组(P均O.05);经穴输氧组MDA含量高于正常对照组(P0.05),而低于各治疗组(P均0.05)。治疗前创伤各组双侧半球不对称,伤侧半球明显肿胀,挫伤中心区有出血、神经细胞坏死,挫伤周边神经组织水肿、细胞肿胀、毛细血管塌陷、有血管外出血;治疗后各组均为正常脑表现。结论:经穴输氧对治疗脑损伤后遗症有效,可以改善脑部血供,纠正组织缺血缺氧,使机体具有对抗自由基损害的而起神经保护作用。
关键词:颅脑损伤;经穴输氧;SOD;MDA
中图分类号:R―33 文献标识码:A 文章编号:1673―7717(2007)11―2330―03
由落体撞击致伤大鼠头部,制造脑损伤模型,经穴输氧治疗后检测SOD、MDA含量变化,探讨各项指标的发生机制以及相互关系与治疗作用,为经穴输氧治疗提供理论依据。
1 实验标准
1.1 试剂与仪器
维生素E(江苏苏星制药有限公司),质量分数为20%的甘露醇(四川乐山第二制药厂),地塞米松(陕西永寿制药有限责任公司),C6805―2A型电针治疗仪(上海华谊仪器制造厂)。丙二醛(MDA)试剂盒(南京建成生物工程研究所),超氧化物岐化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物工程研究所),DG―328A电光分析天平(上海通用激光仪器厂),756MC分光光度仪(上海分析仪器厂)。80―2离心机(上海手术机械厂)。
1.2 实验动物模型制备及分组
健康成年雄性SD大鼠50只(西安医科大学动物实验中心提供),体重(320±40)g。按随机表法随机分为5组:空白对照组;假损伤对照组;电针组(电针+常规治疗);常规治疗组:仙台合剂(甘露醇+地塞米松+维生素E);经穴输氧组(经穴输氧+常规治疗)。创伤性脑损伤模型制备参照Fenneys落体脑损伤模型略作改良。手术方法:大鼠以质量分数为2.5%的戊巴比妥钠按40mg/kg的剂量腹腔注射麻醉,待麻醉平稳后俯卧位于致伤架上,顶部头皮常规消毒后正中切开头皮,暴露双测顶骨,在人字缝前方2mm、中线左侧2mm处顶骨钻孔,扩大骨窗直径约4mm,暴露硬膜,固定头颅致伤架的横杆使致伤锤下端(直径3mm)紧贴硬膜并使其上端突出圆筒3mm(即打击深度),用50g砝码于40cm高出落下撞击致伤顶端,使下端的脑组织发生局限性挫裂伤,止血后用少许骨蜡敷盖骨窗,缝合头皮,即造成创伤性脑损伤模型,假损伤对照组大鼠在钻孔暴露硬膜后不致伤。给药方法、标本采集及指标检测:实验动物均喂食普通饲料7日;给予青霉素50kU预防预防感染,每日1次,连续用7日。仙台合剂按0.417mL/kg剂量给予。电针组使用G6805-2型电针治疗仪,取百会、足三里、阳陵泉、三阴交等穴位,将大鼠固定直刺0.2~0.5mm接电针治疗仪,频率3Hz,电压3V(以肢体微动为准),行针10min,每日1次,连续7日。穴位输氧组取百会、足三里、阳陵泉、三阴交等穴位,采用自制空心针,将氧气利用装置按0.1L/min输入穴位,压力5kPa(1kPa=10.20cmH20),每日1次,每次10min,连续7日。各组动物实验7日后麻醉后立即断头取脑,去除嗅脑、小脑后于正中切开二半球,致伤组取创伤部位周边皮质及对侧相应区域皮质约1.0cm3,对组取双侧大脑对应顶叶皮质约1.0cm3,用DG-382A电光分析天平立即称重之后用0.9%冰冷的生理盐水按150rag:1.5mL的比例用玻璃匀浆器(订制)制成10%脑组织匀浆。用80―2离心机以4000r/min(离心半径为80ram)离心10min之后取上清液冷藏保存待检测。
2 方法
MDA、SOD参照各试剂盒操作测定要求。
2.1 MDA的检测
取脑组织匀浆0.2mL,按TBA法利用过氧化脂质降解产物中的丙二醛(MDA)可与硫代巴比妥酸(TBA)缩合,形成红色产物,在532nm处有最大的吸收峰,利用756MC分光光度仪(上海分析仪器厂)在532nm处比色。测定各标本之吸光度根据公式计算MDA的含量。公式:
品测试前稀释倍数=测定标准中的MDA含量
结果以nm/mgpr表示。
2.2 SOD检测取1
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