辣椒素脂质体在兔耳增生性瘢痕组织中透皮吸收探究.docVIP

辣椒素脂质体在兔耳增生性瘢痕组织中透皮吸收探究[摘要]目的：探讨脂质体包裹的辣椒素对兔耳增生性瘢痕组织的透皮吸收能力。方法：在兔耳增生性瘢痕模型上进行透皮扩散，比较辣椒素脂质体及其普通商用软膏剂对瘢痕皮肤的渗透能力。结果：在体瘢痕透皮试验12h后，脂质体组瘢痕组织中的辣椒素单位面积透皮药量显著高于软膏组(40.03±3.2 vs 9.01±2.02μg/cm2，p＜0.01)。结论：在体瘢痕组织透皮试验中，脂质体剂型均表现出优于软膏剂型的促进辣椒素透皮的能力。 [关键词]脂质体；辣椒素；增生性瘢痕模型；透皮扩散； [中图分类号]R94 R622　[文献标识码]A　[文章编号]1008－6455(2007)07－0881－04 目前在瘢痕的药物治疗研究中发现，多种药物在体外对瘢痕成纤维细胞均有显著抑制作用，但临床上此类药物的常用外用剂型如软膏、霜剂等，局部应用却不能达到较好效果，这与皮肤的特殊结构一角质层以及瘢痕缺乏皮肤附件而阻碍了药物进入皮肤有关。因此找到一种疗效好、全身毒副反应小、又能导入瘢痕皮内并保持较长作用时间的药物和方法是瘢痕防治的关键。 辣椒素(capsaicin，CAP)是一种天然的植物碱，是辣椒中的主要生物活性成分。作为神经肽P物质(substance P，SP)的耗竭剂，新近的研究报道辣椒素具有显著的抗纤维化作用，可用于瘢痕的防治。 脂质体(liposome，Lip)作为一种透皮给药新剂型，具有皮肤组织靶向性、缓释性和无毒性的特点。已有的关于辣椒素脂质体制剂在瘢痕组织离体透皮实验中，已显示了其优于常规局部软膏制剂的促渗透能力的特点。因此，Lip非常有望成为增生性瘢痕局部治疗药物的良好载体。本实验以兔耳增生性瘢痕模型为对象，对辣椒素的普通软膏制剂和脂质体制剂的透皮能力进行比较，为寻找一种安全、有效、方便的外用抗瘢痕药物提供理论依据。 1　仪器与试剂 1．1　材料：新西兰大白兔；辣椒素标准品(美国SIGMA公司)；辣椒素原料药(厦门大学)；0.075％(质量比)辣椒素脂质体(自制)；0.075％(质量比)辣椒素软膏(贵州康运药业)；甲醇、乙氰(均为色谱纯)；其他试剂为分析纯。 1．2　仪器：Waters高效液相色谱仪(美国Water公司)，包括Waters 515型泵，Rheonyde7725i进样器，2487双波长紫外检测器，ChromStationTM色谱数据处理工作站；T18匀浆机(德国IKA公司)；DL－360超声仪(浙江象山县石浦海天电子仪器厂)；TGL－16G台式高速离心机(上海医用分析仪器厂)。 2 方法 2．1　检测方法 2．1．1　色谱条件以及标准曲线：色谱柱：C18柱；流动相：乙氰：水=60:40，(V:V)；流速：1.2ml/min；检测波长：280nm：进样量：20μl；室温操作。精取辣椒素5mg，置于5ml容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀得1×103 mg/L辣椒素储备液。精密量取该液25、50、100、200、400μl分别置于10ml容量瓶中，加入甲醇稀释至刻度，得到2.5、5、10、20、40 mg/L的标准液。进样20μl，记录峰面积。以峰面积为纵坐标，相应质量浓度为横坐标进行线形回归。 2．1．2 回收率与精密度：精密量取线性试验下的中间三个浓度的标准液，依法各自进样3次测定并计算回收率和精密度。 2．2　制作瘢痕模型 2．2．1　实验动物：选用健康成年新西兰大白兔12只，兔耳健全，雌雄不拘，体重3.0－3.5kg，分笼饲养。 2．2．2　参照Morris氏方法并加以改良建立兔耳增生性瘢痕模型：①用速眠新0.1ml/kg肌注全身麻醉；②严格无菌操作技术下，在兔耳腹侧面做1cm×1cm大小创面，去掉兔耳全层皮肤及软骨膜，创缘用烙铁适当烧灼处理，每只兔耳做4个创面，共96个创面；③术后创面暴露，保持干燥待创面自行愈合，一般需要18－21天。 2．3　在体瘢痕透皮实验及其检测 2．3．1　手术后约19天创面完成上皮化时，伴有瘢痕增生，才达到在体透皮扩散实验的要求。用游标卡尺对创面瘢痕进行测量，以标化用药面积。 2．3．2　随机将12只兔的一侧耳设定为辣椒素脂质体用药组，另一侧用辣椒素软膏作对照组。每一侧的四个标本中随机选取三个用药，余下一个作阴性对照。在每个用药的瘢痕上分别均匀地涂抹等量两种制剂，并确保最终辣椒素的用量为100μg，于首次用药后间隔6h复用等量的药物一次，共用2次。涂药范围严格掌握在瘢痕边缘内1mm处。 2．3．3　末次给药6h后处死动物，取软骨以上瘢痕皮肤和鲜血为待检测标本。 2．3．4　瘢痕标本后处理：①透皮扩散实验结束后，瘢痕皮肤先用沾有