Asia1型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的建立.pdfVIP

第 38 卷第3 期 中国预防兽医学报 Vo l. 38 ,No.3 Mar. 2016 2016 年 3 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine doi: 10.3969/j .issn.1008-0589.2016.03.13 Asia1 型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心 ELISA 方法的建立 梁伟峰 13 ，周国辉 2 ，刘文铭 2 ，李超斯 l 气刘 云 l\ 于力 2* (1.东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨 150030; 2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/牛羊病创新团队，黑龙江哈尔滨 150001 ) 摘 要:为建立 Asial 型口蹄疫(FMD)快速病房、学诊断方法，本研究采用纯化的 Asial 型口踌疫病毒(FMDV) 免疫 BALB/c 小鼠，取免疫小鼠脾细胞与 SP2/0 骨髓瘤细胞进行融合并筛选到一株能够稳定分泌抗 Asia 1 型 FMDV 单克隆抗体(MAb) 2EIO。经间接免疫荧光试验特异性鉴定， 2EI0 为 FMDV 型特异型 MAb。其抗体亚类为 4 IgGl/K ，杂交瘤细胞上清和政水抗体效价分别为 }:256 和 1: 10 ，相对亲和力常数为 2.5 rnollL。在此基础上，以本 实验室前期制备的 MAb 2D8 为包被抗体，以 E虫P 标记的 MAb 2EI0 为检测抗体建立了检测 Asial 型 FMDV 抗原 3 的双抗体夹心 ELISA (DAS-ELISA)方法。该方法针对 FMDV 细胞毒的最低检出量为 10 TCID盟，对 0 型 FMDV、 A 型 FMDV、牛肠道病毒、牛呼肠孤病毒及牛传染性鼻气管炎病毒检测结果均为阴性。本研究建立的 Asial 型 FMDV DAS-ELISA 方法为 Asial 型 FMD 病原学诊断试剂金的研发奠定了基础。 关键词: Asial 型口蹄疫病毒;单克隆抗体;双抗体夹心 ELISA 中图分类号: S852.65 文献标识码:A 文章编号: 1008-0589(2016)03-0226-04 Preparation of monoclonal antibody against Foot-and-mouth disease virus serotype Asia 1 and establishment of double-antibody sandwich ELlSA 1 1 LIANG Wei-feng ,Z, ZHOU Guo-hui飞 LIU Wen-mini , LI Chao-sP气 LIU Yun *, YU LF* (1. College ofVeterina