H7亚型和N9亚型禽流感病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立.pdfVIP

畜牧兽医学报 2015 ,46(7):1176-1183 Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica doi: 10. 11843/j. issn. 0366-6964. 2015. 07.014 H7 亚型和 N9 亚型禽流感病毒 RT-LAMP 可视化检测方法的建立 罗忠思，谢芝勋祷，谢丽基，邓显文，谢志勤，黄娇玲，曾婷婷 (广西壮族自治区兽医研究所广西畜禽疫苗新技术重点实验室，南宁 53000 1) 摘 要:应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP) ，建立一种 H7 亚型和 N9 亚型禽流感病毒(AIV) 可视化快 速检测方法。根据 GenBank 中 H7 亚型和 N9 亚型 AIV HA 和 NA 基因序列，在其保守区域设计筛选出 H7 亚型 和 N9 亚型 AIV 的特异性 LAMP 引物各一套，优化反应条件，建立能检测 H7 亚型和 N9 亚型 AIV RT-LAMP 方 法，并进行特异性和敏感性检验。结果显示，该法用实时浊度仪 63 .C 反应 1 h ，能特异性地检测 H7 亚型和 N9 亚 1 型 AIV，而对其他 15 个 H 亚型和 8 个 N 亚型的 AIV 和禽类呼吸道病原体均无扩增，最低能检出 10 拷贝 ·μL- H7 亚型和 N9 亚型 RT-LAMP 方法特异性强、敏感性高，结果可视化，操作简便、快速，为 目的基因。所建立的 H7 、 N9 和 H7N9 亚型 AIV 的有效防控提供技术支撑，具有较好的应用前景。 关键词: H7 亚型禽流感病毒;N9 亚型禽流感病毒;反转录环介导等温扩增z 可视化检测 文章编号: 0366-6964(201日07-1176-08 文献标志码:A 中图分类号:S852.659.5 Visual Detection of H7 and N9 Subtypes A vian Influenza Viruses by Reverse Transcription Loop-mediated Isothermal Amplification Assay LUO Si-si , XIE Zhi-xun* , XIE Li-ji , DENG Xian-wen , XIE Zhi-qin , HUANG Jiao-ling , ZENG Ting-ting (Guangxi Key Laboratory of Anirnal Vaccines and New Technology , Guangxi Veterinary Research Institute , Nanning 530001 , China) Abstract: A reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay was developed for rapid visual detection of H7 and N9 subtype avian influenza viruses (AIV). Accord- ing to the conservative sequences of hemagglutinin (HA) and neuraminidase (NA) genes of H7 and N9 subtype AIV in