薄层板的制备活度检测及应用.docxVIP

验一??薄层板的制备、活度检测及应用一、实验目的与要求1．掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法。2．掌握吸附剂活度测定的原理及方法。3．应用薄层层析法检识中草药化学成分。4. 了解薄层色谱的原理及应用范围。二、实验原理薄层层析是将吸附剂或者支持剂（有时加入固化剂）均匀地铺在一块玻璃上，形成薄层。把欲分离的样品点在薄层板的一端，然后将点样端浸入适宜的展开剂中, 在密闭的层析缸中展开，使混合物得以分离的方法。由于层析在薄层上进行故而得名。　　薄层层析是一种微量、快速的层析方法。它不仅可以用于纯物质的鉴定，也可用于混合物的分离、提纯及含量的测定，还可以通过薄层层析来摸索和确定柱层析时的洗脱条件。薄层层析根据作为固定相的支持物不同，分为薄层吸附层析(吸附剂)、薄层分配层析(纤维素、硅胶、硅藻土)、薄层离子交换层析(离子交换剂)、薄层凝胶层析(分子筛凝胶)等。薄层层析中以吸附薄层为多用，吸附薄层中常用的吸附剂为氧化铝和硅胶（氧化铝的活化温度为150℃－160℃，硅胶的活化温度为105℃－110℃）。吸附薄层主要是利用吸附剂对样品中各成分吸附能力不同，及展开剂对它们的解吸附能力的不同，使各成分达到分离。分配薄层层析在展开过程中，各成分在固定相和流动相之间作连续不断的分配，由于各成分在两相间的分配系数不同，因而可以达到相互分离的目的。薄层层析选择展开剂视被分离物的极性及支持剂的性质而定。如果薄层层析所用的支持剂是吸附剂，在同一吸附剂上，不同化合物的吸附性质有如下规律：1.饱和碳氢化合物不易被吸附；2.不饱和碳氢化合物易被吸附，分子中双键愈多，则吸附得愈紧密；3.当碳氢化合物被一个功能基取代后，吸附性增大。吸附性较大的化合物，一般需用极性较大的溶剂才能推动它。选择展开剂的另一个依据是溶剂的极性大小。极性大的化合物需用极性大的展开剂，极性小的化合物需用极性小的展开剂。一般情况下，先选用单一展开剂如苯、氯仿、乙醇等，如发现样品个组分的Rf值较大，可改用或加入适量极性小的展开剂如石油醚等。反之，若样品的个Rf值较小，则可加入适量极性较大的展开剂展开，或在原来的溶剂中加入一定量极性较大的溶剂进行展层。在实际工作中，常用二种或三种溶剂的混合物作展开剂，这样更有利于调配展开剂的极性，改善分离效果。通常希望Rf值在0.2-0.8范围内，最理想的Rf值是0.4-0.5之间。溶剂极性大小的次序是：石油醚 二硫化碳 四氯化碳 三氯乙烯 苯 二氯甲烷 氯仿 乙醚 乙酸乙酯 乙酸甲酯 丙酮 正丙醇 甲醇 水。?三、时间安排?? 步??? 骤所需时间/h薄层板的制备1.0硅胶的活度测定1.0薄层板的应用2.0合?计4.0?四、实验材料、试剂与仪器1. 仪器与设备载玻片、玻璃片、毛细管、层析缸、滴瓶、喷雾瓶、电吹风、喷雾器、烘箱、干燥器、直尺。2. 材料芦丁标准品、槐米的黄酮提取物等。3. 药品硅胶G、羧甲基纤维素钠、展开剂、显色剂等。五、实验方法与步骤1.薄层板的制备（1）硅胶（G）薄层板的制备?【调浆】取硅胶G或硅胶GF（吸附剂）1份，置烧杯中加水约5份混合成均匀的膏状.【涂布】用药匙取一定量，分别倒在一定大小、洁净、干燥的玻璃板上（或倒入涂布器中，调节涂布器的高度，推动涂布），均匀涂布成0.25-0.5 mm厚度，轻轻振动玻璃板，使薄层面平整均匀。【干燥】室温下在水平位置放置，待薄层发白近干。【活化】将凉干的薄层板置于烘箱中105℃活化0.5-1 h，冷后贮于干燥器内备用。活化温度和时间可依需要调整，一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用。本实验采用下述简易操作涂布薄层：取表面光滑，直径统一的玻璃一支，依据所制备薄层的宽度、厚度要求，在玻璃棒两端套上厚度为0.3-1 mm的塑料圈或金属环，并在玻璃棒一端一定距离处套上较厚的塑料圈或金属环，以使玻璃棒向前推动时能保持平行方向，操作时，将吸附剂均均地铺在玻璃板上，匀速向前推动。????铺板的加水量及活化时间薄层板类型吸附剂：水的量活化温度（℃）活化时间（h）活度氧化铝G氧化铝-淀粉硅胶G硅胶-CMC-Na硅胶-淀粉硅藻土1：21：21：2或1：31：2（0.7%CMC-Na液）1：21：2250150105110110105440.50.50.50.5ⅡⅢ-Ⅴ（2）硅胶（H）羧甲基纤维钠（CMC-Na）薄层板的制备取羧甲基纤维素（粘结剂）0.2 g，溶于25 ml水中，在水浴上加热搅拌使完全溶解，倒入烧杯中，加薄层层析用硅胶（颗粒度10-40 μm的约6-8 g）混合成均匀的稀糊，按照硅胶G薄层涂布法制备薄层，或取0.8 %（羧甲基纤维钠1 0 ml，倒入广口瓶（高约10-12 cm）中，然后逐步加入薄层层析用硅胶3.3 g，不断振摇成均匀的