薄层色谱之薄层板的制备技术和薄层分析的点样技术训练.docVIP

色谱知识理论之 薄层色谱理论基础、操作及薄层扫描法简介 药检文摘日期:20-8-11 薄层色谱基础理论、操作及薄层扫描法简介 　　一、基本概念及机理　　1基本概念：层析法（色谱法）是利用混合物中各组分（或成分）的理化性质的差别，使各组分以不同程度分布在两个不相混溶的相中，由于各组分的不同速度移动，因而达到分离的过程及方法。　　层析法分为：纸色谱法、薄层色谱法、柱色谱法、气相色谱、液相色谱法等，我们主要讨论薄层色谱法。　　薄层色谱法（层析法）根据层析原理分为二大类：　　吸附层析：利用被分离物质在吸附剂上被吸附能力不同，用洗脱液使组分分离，如硅胶G氧化铝薄层层析。　　分配层析：利用被分离物质在两相中分配系数不同使组分分离。如微晶纤维素层析、纸层析等。　　2层析机理:从层析法概念中我们了解任何层析都关系到被分离物质溶质在两相之间的分配，即关系到分配系数（K溶质在固定相中浓度/溶质在流动中浓度的大小只是在不同层析法中K有不同的意义。　　在吸附层析法中K称为吸附系数。KXa/Xs表示在一定温度下达到平衡时在单位时间内被吸附剂表面吸附的溶质的浓度Xa与从吸附剂表面解吸附到溶剂展开剂中溶质浓度Xs之比。　　分配层析法：K为分配系数，即在一定温度下达到平衡时，溶质在固定相中的浓度Cs与其在流动中的浓度Cm之比。　　即KCs/Cm　　二、薄层材料及薄层板的制备　　1材料：　　背材：支持薄层吸附剂的物质　　要求：有一定的机械强度；能耐受展开剂和显色剂的化学作用及腐蚀；能耐受反应的温度；表面光骨，平整，有一定的厚度，保证吸附剂厚度均匀，以免引起误差。仪器扫描用板要求一定的板厚以便薄层斑点在仪器光束的焦距上（如Cs930要求厚度在15mm左右。　　常见背材是玻璃板，一般使用的是镜面玻璃；在涂铺薄层板前，将玻璃划裁成长宽为10×1010×1520×1020×20cm的玻璃板磨边之后用洗液或洗涤剂浸泡、洗净、晾干，表面不应有指纹、油迹、水迹，否则影响吸附剂的牢固度及定性定量的准确性。　　吸附剂：利用薄层层析解决一个分析任务，主要在于选择好合适吸附剂与展开剂。　　常用吸附剂简介：按文献统计，在日常工作中硅胶G使用率在50、硅胶10、纤维素9、氧化铝3、聚酰胺25。　　下面对使用率高的几个吸附剂进行讨论。　　硅胶：缩小硅胶整个结构中含有许多硅醇基-Si-OH硅胶的吸附性主要在于此基团，基上羟基与极性化合物或不饱合化合物形成氢键，产生吸附力。　　氧化铝由于制备方法和处理方法不同，氧化铝可分为中性、碱性和酸性氧化铝。　　氧化铝的吸附力主要依靠其氧原子与被测物中活泼氢结合成羟基而产生的。另外其暴露的Al3与芳香环上л电子作用形成复杂的络合物也是产生吸附的因素。　　聚酰胺：常用有四种，聚酰胺6、66、11、乙酰化聚酰胺、吸附力由其内部存在的酰胺键与被分离组分中的酚、酸、醌及硝基化合物形成氢键而产生的。　　纤维素：常用有天然纤维素、微晶纤维素等。　　其结构是含大量β-1、4葡萄糖甙键合的纤维二糖分子中大量的羟基使其具亲水性，在铺板中带入水分被纤维素吸附变成为分配薄层中的固定相。　　2薄层板的制备：要求薄层板各部位的厚度均匀一致，表面平整，无划痕，少气泡，牢固性好。　　制板：将吸附剂涂铺在一定背材上，使成厚度均匀一致的薄层的过程。　　方法：分干法、湿法。一般常用湿法。　　湿法铺板程序：将吸附剂用一定比例的水溶液或者是含粘合剂的水溶液调匀成糊状，后用手工或机器将吸附剂均匀涂布薄层背材上（厚度一般在025-055mm之间置水平台上，自然阴干，吸附层析板在使用前置105活化1小时后置干燥器中备用。　　手工制板时使用刮板器将调匀的吸附剂通过03mm或05mm狭缝刮铺在背材上、刮铺力度要均匀，一般制出薄层板较佳。机器铺板的原理同手工制板，只是刮铺的速度较均匀（由机器控制）故制备的薄层板质量较稳定。　　另外还有倾注铺板法、浸渍法、喷雾法等。　　薄层板制备中注意问题。　　含煅石膏作粘合剂的吸附剂在加水或含CMC的水溶液调匀后，在2分钟内铺板以免粘合剂固化而使铺板固难。　　铺板时防止板面有气泡的方法是调匀吸附剂时玻棒顺一个方向搅动，再者在调匀时滴加少许乙醇。　　铺板时不同吸附剂一般情况下，与溶液之比例为1:3活化11030分钟。　　关于活化问题，活化就是将吸附剂水分加热去掉的过程，其目的就是增加吸附剂的吸附能力，增加活度。　　关于活度问题：薄层活化是将吸附剂中水解吸附的过程，但吸附剂与水的结合（氢键）是可逆的。判定吸附能力大小的标志是活度，活度一般分五级，测定过程是将几种染料的配成混合液，在一定条件下展开，检查其分离度大小来判别的。在实际工作中一般不测定活度，但在上述规定活化的条件制备薄层板的活度一般在－级，注