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制作优质HE病理组织切片要素【摘要】 目的 制作一张优质的病理组织切片。方法 对病理组织制片过程中出现的问题加以注意及改进。结果 病理组织固定、脱水效果好，制作的组织切片薄，HE染色胞浆分明。 【关键词】 病理组织；取材；脱水；切片；HE染色 病理组织石蜡制片技术是病理诊断的基础，制片质量的好坏是指导医师作出准确诊断的重要保证。常规石蜡制片一般经过取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封片等一系列的步骤，一个步骤做不好都会影响组织切片的质量。本文就我们科在日常工作中各步骤可出现的问题总结出一些经验和体会，现介绍如下。 1 材料 1.1 各类病理组织标本 1.2 仪器 SHANDON-Thermo全封闭式组织处理机、包埋机、切片机。 1.3 试剂 10%福尔马林、AAF固定液、梯度酒精、二甲苯、石蜡(58~60℃)、苏木素、伊红 2 方法 2.1 取材 临床医师切取标本后，应尽快将标本置于10%福尔马林液内固定，固定液量为4~5倍于标本体积，也可达到15~20倍。对较大的标本应切开固定，切开厚度为1 cm左右，为保存标本的原有大体形态，切开时最好不要完全断开。固定时间应视标本大小而定，小标本应不少于4 h，大标本应不少于8 h。取材组织面积为2 cm×1.5 cm，厚度不超过0.3 cm，骨组织或钙化组织需先经10%硝酸水溶液脱钙至针刺入无阻力感后再取材。 2.2 脱水 标本放入全封闭式组织处理机后，AAF固定液1 h→80%酒精30 min→90%酒精30 min→95%酒精Ⅰ1 h→95%酒精Ⅱ1 h→无水乙醇Ⅰ1 h→无水乙醇Ⅱ1 h→无水乙醇Ⅲ1.5 h→二甲苯Ⅰ30 min→二甲苯Ⅱ1 h→石蜡Ⅰ30 min→石蜡Ⅱ30 min→石蜡Ⅲ1 h→石蜡Ⅳ1.5 h。 2.3 包埋 将脱水后的组织按不同要求用石蜡(58℃~60℃)进行包埋。 2.4 切片 将冷却的蜡块放于切片机上切片，厚度一般为3~4 μm。 2.5 染色 石蜡切片脱蜡至水→放入苏木素工作液内染色1~5 min→自来水洗1 min→1%盐酸酒精分化10 s→自来水洗1 min→稀氨水(1%)反蓝20 s→自来水洗1 min→95%酒精10 s→乙醇性伊红液1~3 min→85%酒精1 min→90%酒精1 min→95%酒精Ⅰ1 min→95%酒精Ⅱ1 min→100%酒精Ⅰ1 min→100%酒精Ⅱ1 min→二甲苯透明，电风筒吹干后，用中性树胶封片。 3 结果 组织固定、脱水效果好，易于连续制薄片，HE染色胞浆分明。 4 讨论 准确的病理诊断离不开好的石蜡制片，制作出好的石蜡切片需要我们每个步骤的正确与认真。临床医生切取标本后，应尽快将标本置于盛有足够固定液的容器内，固定液量一般为4~5倍于标本体积，也可达到15~20倍［1］。大标本及有包膜的标本要切开固定，切开间距为1 cm，切开时不应完全断开，应保存标本原有的大体形态。固定时间应视标本大小而定，小标本不少于4 h，大标本则不少于8 h，尽可能的避免出现因固定不及时或不充分导致标本干涸或腐败而无法制片。取材时组织面积为2 cm×1.5 cm，厚度不超过0.3 cm，组织太大或过厚时均可降低脱水效果，骨组织或钙化组织需先经10%硝酸水溶液脱钙至针刺入无阻力感后再取材。为达到最佳脱水效果，脱水机内的试剂要经常更换。我科经多年实际操作对比总结，组织块达到500~700块时更换AAF固定液；组织块3500块左右时更换两道100%酒精和两道石蜡(即只更换前面A缸、B缸蜡，同时把原来没有更换的C缸、D缸石蜡重新设定为A缸和B缸，把新更换的石蜡再设定为C缸和D缸)；组织块达到7000块左右时将所有试剂更换［2］。如此操作时既能保证组织达到最佳脱水效果，而且能延长脱水机内试剂使用周期，降低了成本。组织包埋时石蜡温度应与组织温度相接，不然会引起组织与周围石蜡脱裂，影响制片质量［3］。包埋时镊子温度亦应与组织温度接近，否则会黏附组织，造成相互污染。包埋面要平，特别是碎小组织要聚集平铺，这样才能保证留片时切全组织。使用轮转式切片机切片时，应先将蜡块冷却，使刀刃与蜡块表面呈5°夹角，一般切片厚度为3~4 μm，切片时应修出标本至最大面暴露后再留片，小标本不要修太多，大标本应切全。修蜡块与留组织片时不要在同一个刀位，在一边修好蜡块后移到另一边留片。使用新刀切片时应尽量先切小组织或淋巴结等实性组织，再切脂肪、肌肉等组织，最后切骨组织及钙化等较硬组织。用轮转式切片机切片时应将组织硬脆难切的部分放在上端(如皮肤组织应将表皮部分向上，而胃肠等组织应将浆膜面朝上)，这样既可以省刀又能保证切片质量。留片时脂肪组织因内充满脂肪滴，不易被