番鸭源禽1型副黏病毒HN基因主要抗原结构域和V基因融合表达载体的构建.PDF

吉林农业大学学报 　2009 ,31( 1) :84～87 http :/ / x uebaoj lau educn J ournal of J ilin A gricultural University Email :j lndxb @vip sinacom 番鸭源禽 1 型副黏病毒 HN 基因主要抗原结构域 和 V 基因融合表达载体的构建 傅光华, 程龙飞, 施少华, 陈红梅, 彭春香, 黄 　瑜 (福建省农业科学院畜牧兽医研究所 , 福州 350013) ( ) 摘 　要 : 为构建番鸭源禽 1 型副黏病毒 HN 主要抗原结构域 HNd 和 V 基因融合表达载体 ,经 PCR 及融合 PCR 分别从重组质粒 pMDHN 和 pMDP 中扩增 HN 基 因主要结构域和 V 基 因 cDNA 。将 HNd 经 Kp n Ⅰ和 B am H Ⅰ双酶切 、V 基因用 EcoR Ⅰ和 X ho Ⅰ双酶切后 ,分别定向插入真核载体 pcDNA3 的多克隆位点相应的酶 切位点中 ,对 2 个单表达质粒 pcDNAHNd 和 pcDNAV 进行酶切和测序鉴定 。利用融合 PCR 技术扩增出 HNdV 基因 ,定向克隆至 pcDNA3 的 EcoR Ⅰ和 X ho Ⅰ酶切酶切位点之间 ,转化感受态细胞后 ,经 PCR 反应初筛后 ,对 阳性克隆进行酶切分析及测序鉴定 。对单表达重组质粒进行酶切分析及测序鉴定 ,结果表明:HNd 和 V 基因 已被正确定向克隆至真核表达载体 pcDNA3 ,成功构建了 2 个基因的单表达质粒 pcDNAHNd 和 pcDNAV ;对融 合重组质粒酶切分析和测序鉴定表明 ,HNdV 融合基因正确克隆进真核表达质粒 pcDNA3 中 ,成功构建了融 合表达载体 pcDNAHNdV 。 关键词 : 番鸭源 ; 禽 1 型副黏病毒 ; HN 基因主要结构域 ; V 基因; 融合表达载体 ( ) 中图分类号 : S85265 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 2009 Construction of Fusion Gene Vector with the Major Antigenic Domains of Muscovy Duck Original Avian Para myxovirus Type 1 HN Gene and the Whole V Gene FU Guanghua , CHEN G Longf ei , SHI Shaohua , CHEN Hongmei , PEN G Chunxiang , HUAN G Yu ( Institute of A nimal Husbandry and Veterinary Medicine , Fuj ian Academy of A gricultural Sciences , Fuz hou 350013 , China)