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几种高温DNA聚合酶性质比较+文献综述 摘要耐热DNA聚合酶的使用大大地简化了PCR操作过程，扩大了PCR技术的应用范围。本课题是运用基因工程技术将从嗜热菌Thermus aquaticus中克隆获得Taq DNA聚合酶的基因进行蛋白融合及定点突变改造，并建立重组Taq酶的大肠杆菌高效表达体系，诱导表达、提取和纯化获得纯重组酶，并将其应用到不同的PCR体系中，从而验证重组酶的活性，进一步完善了新型的DNA聚合酶Taq的一般扩增方案。随着DNA聚合酶研究的发展，PCR技术的应用范围也在不多的拓宽。怎样进一步改善耐热性DNA聚合酶的酶学性能，解决DNA聚合酶高效性与保真性之间的矛盾，已成为广大分子生物学研究者关注的热点。本实验所涉及的pfu-x7 和Tap-omni DNA聚合酶，通过对其性质的比较研究发现，它们在DNA聚合酶的高效性和保真性方面确实有了更好的加强。7750 关键词Tap-omnipfu-x7高效性保真性 毕业设计说明书（论文）外文摘要 TitleComparison of several high-temperature polymerase Abstract The use of thermostable DNA polymerase greatly simplified the PCR procedure, and expanded the application rage of PCR technology. This topic is the use of genetic engineering technology from the thermophilic bacterium Thermus aquaticus cloning get in Taq DNA polymerase gene fusion protein and site-directed mutagenesis transformation，And to establish a restructuring of e. coli Taq enzymes to efficiently express system, inducible expression, extraction and purification of pure recombinant enzyme, And apply it to different PCR system，To verify the activity of the recombinant enzyme, Further improve the new general amplification of Tap DNA polymerase . With the development of DNA polymerase, the scope of application of PCR technology are few expanding，How to further improve the enzymatic properties of the heat-resistant DNA polymerase, to solve the contradiction between the efficiency and fidelity of DNA polymerase, has become the focus of attention of the majority of molecular biology researchers. 20世纪60年代末、70年代初人们致力DNA的体外分离技术，Khorana等于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：ldquo;经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复过程便可克隆tDNA基因。rdquo; 1985年，美国PE-Cetus公司的Mullis等[1]发明了聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction)，并利用此技术扩增出人的beta;-球蛋白基因，并将其应用于镰刀型贫血病的基因诊断[2]。它是一种在生物体细胞外通过酶促合成特异DNA或DNA片段的方法，即双链DNA在高温下变性解链成单链，在DNA聚合酶、特异性寡核苷酸引物、dNTP等的参与下，根据碱基互补配对原则复制成相同的两分子DNA[3-5]。具有操作简便快捷、灵敏度高、特异性强及对样品的耐受性好等优点[6]，因此，此项技术一经问世就在与分子生物学相关的学科领域中得到广泛应用。 PCR技术的诞生是基于DNA分子双螺旋结构模型的建立以及DNA半保留复制[7]机制的发现。1953年Waston等[8,9]在Nature上发表第一篇关于DNA分子双