氧化石墨烯和聚合延伸的荧光发夹引物检测DNA聚合酶.docVIP

氧化石墨烯和聚合延伸的荧光发夹引物检测DNA聚合酶 摘要：氧化石墨烯(GO)具有良好的水溶性和生物相容性,并且可以吸附DNA单链并猝灭链上荧光染料的荧光，从而在生物分子的检测中应用广泛。本实验中，我们设计了一条单链DNA探针，探针的5#39;端荧光标记，另一端序列可以自杂交形成小发夹结构，从而形成了一个发夹引物。在目标聚合酶和dNTPs混合物存在下，发生聚合延伸形成双链DNA产物，加入GO后，仍然得到较强的荧光信号。没有聚合酶不能发生聚合延伸反应，荧光发夹引物会被GO吸附猝灭，从而实现对目标聚合酶KF活性的检测。该方法简便快速、灵敏高，还可以进一步用作聚合酶抑制剂的筛选。9231 关键词：氧化石墨烯; KF聚合酶; 发夹引物 Fluorescent Hairpin Primer for Assay of DNA polymerase Based on Graphene Oxide and Polymerization Extension Abstract: Graphene oxide (GO) has an excellent solubility and biocompatibility, which can also adsorb the single-stranded DNA (ssDNA) and quench its fluorescence, thus has found a wide application in biomolecular detection. In this paper, we synthesized a 5#39; dye-labeled ssDNA probe, and it can self-hybridize into a hairpin primer (HP). In the presence of target polymerase and dNTPs, HP can undergo polymerase elongation and generate double-stranded DNA (dsDNA). Upon addition of GO, it can also obtain a strong fluorescence signal. While the polymerization extension wonrsquo;t occur in the absence of target polymerase, and the HP will be adsorbed and quenched by GO. By monitoring the fluorescence change of this system, the detection of polymerase activity can be realized. The proposed method is simple, rapid and high sensitive, which can also be used for screening the inhibitors of polymerase. Key words: Graphene oxide (GO); KF polymerase; Hairpin primer (HP) 目录 摘要1 发夹形的寡核苷酸探针广泛应用于DNA-蛋白质相互作用研究[10,12], 诊断遗传病 [11]和检测溶液中的核酸以及活体分析。Tang等人[13]利用双标记的发夹探针，开发了一种实时荧光监测核酸磷酸化过程的方法。单标记的发夹形寡核苷酸与传统的双标DNA发夹探针相比，具有成本低和能提供一个自由端进一步修改的显著优点。 石墨烯是碳材料家族中的最新成员[14]，具有大的比表面积，它只有一个碳原子厚度 [15]。2004年，英国的两位科学家第一次从石墨中分离出石墨烯[16]。石墨烯的基本单元是苯的六元环结构, 这种特殊结构赋予了其独特的热学、力学和电学性能[17]，如优秀的导电性和优良的机械强度，使其成为最理想的材料。GO是石墨烯的衍生物之一，通过产生表面羧酸和羟基来提高其在水中的溶解度。GO具有独特的性质，首先GO能够吸附单链DNA并具有高亲和性，而对双链DNA或DNA片段的亲和力则低得多；其次，GO是一个通用型的荧光猝灭剂，多种荧光体如荧光染料和量子点的荧光可通过GO实现高效率的猝灭。近年来，基于氧化石墨烯（GO）构建的光学生物传感器广泛应用在核酸[18],蛋白质[19]，病毒[20]，金属离子[21]，小分子[22]的检测和药物传输方面[23]。 本论文中，我们设计了一条单标记的荧光DNA探针，它可以自杂交形成发夹引物，并能在目标聚合酶的作用下发生聚合延伸