基因枪法建立紫菜丝状体遗传转化模式.pdfVIP

高技术通讯 年第 卷第 期： ： 基因枪法建立紫菜丝状体遗传转化模式! # 张 皃 姜 鹏 杨 锐 费修绠 唐学玺 秦 松 （ 中国海洋大学海洋生命学院 青岛 ） （ 中国科学院海洋研究所 青岛 ） （ 宁波大学海洋生物工程浙江省重点实验室 宁波 ） 摘 要 以坛紫菜和条斑紫菜的自由丝状体为材料，利用基因枪法分别转化 、 、 、 、 种启动子与报告基因组合，转化后 进行原位组织化学染色检 测，首次针对重要经济红藻紫菜的自由丝状体建立并优化遗传转化技术，为紫菜研究提供 了新工具。结果显示， 启动子可以驱动 报告基因（编码 半乳糖苷酶）在紫菜 $ 丝状体中的瞬间表达，空白与阴性对照未检测到本底；其它 种启动子未检测到基因表 达。进一步优化实验发现，在可裂膜 、轰击距离 下获得最高转化效率为 ，经定量检测与双因子方差分析，是最佳转化参数，提示基因枪参数对外源基因转化 效率具显著影响。 关键词 紫菜，丝状体，基因枪， 报告基因， 启动子 合型启动子的功能验证。上述研究充分表明，针对 引言 紫菜叶状体体细胞原生质体，电击与 法是有效 紫菜是目前经济价值最高的一种栽培海藻，我 的基因导入方法，紫菜叶状体的瞬间表达体系也成 国是紫菜栽培大国，紫菜干品的年产量达到 万 为重要的研究手段。但普遍的问题是，目前基因表 吨［ ］，长江以北以条斑紫菜（ ）为 达仅限于原生质体阶段，在再生叶状体中尚未检测 主，长江以南，特别是福建、浙江主要栽培坛紫菜 到表达。推测原因在于：紫菜叶状体为遗传嵌合 （ ）。近年来，随着栽培面积的扩 体［ ， ］，由其制备的原生质体遗传性可能不均一， 大，紫菜面临养殖品种退化和病害频发的严峻局 研究者尚无法确定原生质体阳性转化子的遗传学特 面［ ］。因此，开展紫菜基因工程研究，利用现代分 性。另外，叶状体细胞原生质体的发育也表现多向 子生物学手段培育紫菜抗逆新品种，是解决上述问 性［ ］，这提示应该尝试新的紫菜转化受体。 题的重要途径之一。 紫菜的生活史存在叶状体与丝状体的世代交 由于紫菜叶状体体细胞原生质体的制备与再生 替，与叶状体相比，丝状体具有易培养、可长期保存、 技术比较成熟［ ］，原生质体成为目前研究最广泛的 遗传性均一、定向发育等优势。本文以紫菜自由丝 状体纯系为材料，采用基因枪法（ 受体材料，用于电击或聚乙二醇（ ）法转化。