基于 DNA-launched 的猪繁殖与呼吸综合征病毒反向遗传操作系统的建立.pdfVIP

， ， （ ）： ２０１６ ３７ １１ １ ８ Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ 檲 殘檲檲檲檲殘 研究论文 殘 檲 檲檲檲檲殘 基于ＤＮＡｌａｕｎｃｈｅｄ的猪繁殖与呼吸综合征病毒 反向遗传操作系统的建立 ， １ ２ ２ １ １ ２ ２  曹宗喜 ，焦培荣 ，谭树义 ，叶保国 ，亓文宝 ，张桂红 （ 海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验 ，海南海口 ； １． ５７１１００ 华南农业大学兽医学院广东省动物源性人兽共患病预防与控制重点实验 ／国家生猪种业工程中心，广东广州 ） ２． ５１０６４２ 摘 要：为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒（ ）反向遗传操作系统，将 全基因组分 段克 ＰＲＲＳＶ ＰＲＲＳＶ ６ 隆，构建获得 个重组质粒，先由 和 片段或 和 片段连接构成 片段或 片段，然后 、 、 和 ６ Ａ１ Ａ２ Ｂ１ Ｂ２ Ａ Ｂ Ｄ Ｃ Ｂ 片段依次亚克隆入 ＯＫ 载体。在基因组 端和 端分别加上 启动子序列和 终止信号肽，全 Ａ ｐ ｑ ５′ ３′ ＣＭＶ ＢＧＨ 基因组 ５１０ 位核苷酸突变引入遗传标记位点 Ｆｓｅ Ⅰ。测序正确的全基因组质粒命名为ｐＯＫ Ａ２ＢＣＤ 。再将 质粒转染 细胞，拯救病毒通过 、酶切、测序和间接免疫荧光试验（ ）鉴定，结果 ｐＯＫ Ａ２ＢＣＤ ＢＨＫ ２１ ＰＣＲ ＩＦＡ 表明拯救病毒成功，为进一步研究ＰＲＲＳＶ 致病性等相关分子机制奠定了基础。 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；反向遗传操作系统；构建 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．６５９．６ Ａ １００７５０３８ ２０１６ １１０００１０８ 猪繁殖与呼吸综合征（ 达载体上获得具有感染性的 ｃＤＮＡ ，再将该质粒转染 Ｐｏｒｃｉｎｅ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ａｎｄ ， ）是由猪繁殖与呼吸综 细胞，经细胞内转录生成具有感染性的病毒 ＲＮＡ ，获 ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ＰＲＲＳ 合征病毒 （ 得重组病毒。与基于 ＲＮＡ ｌａｕｎｃｈｅｄ 的方法相比，基 Ｐｏｒｃｉｎｅ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ， ）感染猪所致的一种急性传 于