尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT-PCR方法的建立.pdfVIP

动物医学进展。2016，37(1)：11—16 in Medicine ProgressVeterinary 尼帕病毒与猪流感病毒双重荧光定量RT—PCR方法的建立 王建华，赵祥平’，董志珍，肖 妍，王玉玲，张俊哲，陈小金，王乃福，陈本龙，赵 丹 (天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，天津300456) M基因的RNA 线性范围、敏感性、重复性和特异性进行了评价及初步应用。结果显示，用该方法检测NiV 标准对照(NiV—M—RNA)和SIV i01 copies／肚L和5．8×101copies／“L～5．8×108 copies／扯L～4．6×108 copies／uL，检出限分别为46个拷贝 舜口58个拷贝。该方法的组内试验和组间试验的变异系数均小于1．6％，显示其良好的可重复性。该方法仅 了一种快速、敏感和特异的技术手段。 关键词：尼帕病毒；猪流感病毒；TaqMan—MGB探针；双重荧光定量RT—PCR 中图分类号：$855．3 文献标识码：A 20世纪90年代末，在马来西亚确定了一种以要的公共卫生意义[6书]。SIV属于正黏病毒科A型 侵害人和猪的神经系统和呼吸系统为主要特征的新 流感病毒属，为单股负链RNA病毒，其基因组约为 13．6 virus，NiV)[Ij。该病毒kb，由大小不等的8个独立片段组成[6]。在我 病毒——尼帕病毒(Nipah 的基因组为不分节段的单股负链RNA，全长约18．2 kb，含有6个转录单位，依次编码核蛋白(N)、磷蛋 行和危害比较严重[9_10]。由于猪的尼帕病毒感染与 白(P)、基质蛋白(M)、融合蛋白(F)、受体结合蛋白 猪流感病毒感染有相似的症状表现，仅凭临床症状 (G)和大蛋白(L)等6个结构蛋白[2]。流行病学研 究表明，狐蝠是尼帕病毒的自然宿主，尼帕病毒对蝙 无法准确区分这2种动物疫病。在当前我国猪群普 蝠不致病，对猪有一定的致病性，但对人的致病力很 遍存在SIV感染的背景下，一旦出现疑似猪尼帕病 毒感染疫情时，需要对临床疑似发病猪进行NiV和 强，病死率可达40％～70％[3]。尼帕病毒可在感染 猪体内大量繁殖，病毒血症持续时间较长，通过呼吸 SIV的鉴别检测，为及早发现和迅速控制猪及人的 道、尿液、粪便等途径向外界散播病原，人类通过与 尼帕病毒感染提供病原学依据。近年来，国内外针 病猪及其样本接触可以感染尼帕病毒口]。因此，对 猪尼帕病毒感染的监测是防控人类尼帕病毒感染的 RT-PCR方法L11’14|。本研究以NivM基因和SIV 重要措施。在我国的华南地区和东南部沿海岛屿有 M基因为靶序列，建立了一种鉴别Niv和SIV的双 着广泛的果蝠分布且与人畜有重叠活动范围，因此， 重荧光定量RT—PCR检测方法。 在理论上我国存在自然发生人和猪的尼帕病毒感染 1材料与方法 influenza，SI)是由猪1．1 的可能性[4弓j。猪流感(Swine 材料 influenza 流感病毒(Swine virus，SIV)引起的一种1．1．1 病毒、菌株及质粒载体猪瘟病毒(CSFV)、 猪的急性、热性和高度接触性呼吸道传染病，该病不 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻 仅给畜牧养殖造成了严重的经济损失，而且具有重 收稿日期：2015-07—31 作者简介：王建华(1965一)，男，黑龙江林口人，高级兽医师，农学博士，主要从事动物疫病检测与诊断试剂研制。*通 讯作者 12 动物医学进