小鼠克雷白杆菌肺炎模型的建立及检测.pdfVIP

魏　 晶等　 小鼠克雷白杆菌肺炎模型的建立及检测　 第1期 ·85 · doi:10.3969/ j.issn.1000-484X.2014.01.017 小鼠克雷白杆菌肺炎模型的建立及检测① ② ② 魏　 晶　 陈纪飞　 李　 强 　 安　 英 　 李　 芳 (大连医科大学基础医学院免疫学教研室,大连 116044) 　 　 中图分类号　 R392　 　 文献标志码　 A　 　 文章编号　 1000-484X(2014)01-0085-04 [摘　 要]　 目的:研究有效建立小鼠克雷白杆菌肺炎模型的方法并进行相关炎症因子检测。 方法:构建动物模型,C57 6 小鼠随机分为对照组和模型组,应用气管内注射肺炎克雷白杆菌(10 cfu,20 ml)的方法建立肺炎模型,感染后24 h,观察小鼠 一般状态;收集肺泡灌洗液、分离肺组织,大体观察;肺组织切片HE染色观察两组小鼠炎症情况;肺泡灌洗液进行中性粒细胞 计数,肺泡灌洗液和肺组织MPO检测的方法来比较两组小鼠中性粒细胞浸润情况;应用实时定量PCR、Western blot对两组小 鼠相关炎症因子进行检测。 结果:和对照组相比,模型组小鼠出现明显喘息,寒颤以及竖毛;肺部出现明显的充血、水肿;HE 染色显示模型组肺泡壁增厚,大量炎症细胞浸润;模型组肺泡灌洗液中性粒细胞的数量明显高于对照组(P 0.05);模型组支 气管肺泡灌洗液和肺组织中MPO表达水平均明显高于对照组(P0.05);实时定量PCR、Westernblot结果均表明模型组小鼠 肺组织中炎症因子较对照组明显升高。 结论:利用气管内注菌建立小鼠克雷白肺炎模型的方法确实可靠,该模型可用于细胞 因子及其受体与克雷白杆菌肺炎关系的研究。 [关键词]　 克雷白杆菌;肺炎;模型 Establishment and detection of a mouse pneumonia model induced byKlebsiella pneumoniae WEI Jing,CHEN Ji-Fei,LI Qiang,AN Ying,LI Fang. DalianMedical University,Dalian 116044,China [Abstract]　 Objective:To establish the Klebsiellapneumonia model of mice and to detect inflammatory cytokines. Methods: C57 micewere divided into different groups randomly. The pneumonia models were established by intratracheal Klebsiellapneumoniae 6 (10 cfu,20 ml). 24 h after infection,the general statusand change inbreathingwereobserved. General observation and HE staining of the lungswereconductedafterharvesting. Thenumber of neutrophilsin BALFwascounted,MPOactivity in BALFandlungtissues was detected. The inflammatory cytokineswere detected by real time PCR and Western blot. Results:Compared with control group, therewere obvious congestion and edema inthelungtissue,more inflammatory cellsinfiltration after HE staining,moreneutrophilsin BALF(P0.05),andmoreexpressionof MPOintheBALFandinthelungtissueintheinfectedgroup(P0.05).Thelevelsof some inflammatory cytokines