小鼠微小病毒(MVM)荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用.pdfVIP

第32卷第5期 实验动物科学 V01．32No．5 2015年10月 LABORATORYANIMALSCIENCE October2015 妒舻移诊，驴勺 §研究论著§ 易、扩、扩、护、驴圆 小鼠微小病毒(MVM)荧光定量PCR检测方法的 建立及初步应用术 王淑菁 付 瑞 李晓波 王 吉 岳秉飞 贺争鸣 (中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所。北京 100050) 摘要：目的 建立小鼠微小病毒(MVM)荧光定量PCR方法，并初步应用于实验小鼠中。方法 根据NCBI上发表 围，特异性及灵敏度，并使用该方法对178份清洁级小鼠粪便DNA样本进行检测。结果MVM荧光定量PCR方 强，与大鼠细小病毒H一1株和KRV株、猪细小病毒均无交叉反应。应用荧光定量PCR方法对178份小鼠粪便DNA 进行检测，结果均为阴性。结论建立的MVM荧光定量PCR方法具有特异、灵敏的特点，为MVM的流行病学调 查、检测提供了有效的技术支持。 关键词：小鼠微小病毒；荧光定量PCR；小鼠 中图分类号：Q939．47文献标识码：B 文章编号：1006—6179(2015)05—0018-04 小鼠微小病毒(MVM)属于细小病毒科，细小病些弊端，如无法应用于免疫缺陷小鼠、细胞系和生物 毒属，广泛存在于实验小鼠和野生小鼠群中，具有高 原材料中MVM的检测”1，由此，本研究拟将建立 度传染性。MVM主要是通过带毒小鼠粪便和尿液 MVM的荧光定量PCR方法，特异性地针对病毒核 向外排毒，易感小鼠经直接或间接接触而感染，也可 酸进行检测，不仅可以实现对实验小鼠的大样本筛 经胎盘垂直传播，但不能通过空气传播。Crawford 查，也可以对细胞系和生物原材料进行外源因子 从小鼠腺病毒中首次分离到MVM，为无囊膜单链 检测。 DNA，对理化处理抵抗力强，之后相关学者在小鼠淋 巴瘤肿瘤组织、小鼠白血病病毒毒种中分离得到污 1材料与方法 染的MVM‘12I。 MVM感染小鼠后，通常无明显临床症状，但研 1．1 病毒 究表明，在涉及免疫系统、肿瘤和移植的实验中，实 小鼠微小病毒(MVM)、猪细小病毒、大鼠细小 验小鼠感染了MVM将会严重影响实验数据的准确 病毒H一1株和KRV株均购自美国ATCC。 性和可信性”3。此外，MVM也极易污染啮齿类细1．2主要试剂 胞系、生物原材料，其中中国仓鼠卵巢细胞(CHO) TakaraMiniBESTViral RNA／DNA提取试剂盒 UniversalPCR 和叙利亚仓鼠肾细胞(BHK21)是MVM的易感细 Master 购自TaKaRa公司：TaqMan 胞，一旦污染了MVM，将会对生物技术产品造成巨 Mix购自AppliedBiosystems公司。 大的经济损失”。。 1．3引物和探针的设计 目前常规的MVM检测方法是血清学检测方 法，尽管可进行大样本筛查，灵敏度高，但仍存在一 序列，通过BLAST比对分析选择保守特异区域设计 收稿日期：2015一07—29 ‘基金项目：普通级封闭群裸鼹鼠种群的建立及耐低氧机制的初步研究(No．2015BAl09802) 作者简介：王淑菁(1985一)，女，助理研究员。研究方向：实验动物病毒学。E-mail：ws163．com 通信作者：贺争