小干扰RNA对大鼠T淋巴细胞CD28基因表达的抑制作用.PDFVIP

维普资讯 7年1月第24鲞第 1期 ChinJExpSurg。January2007。Vol24．No．1 · 25 · - 实 验 研 究 · 小干扰 RNA对大鼠T淋巴细胞 CD28基因 表达的抑制作用 朱冠宇 孙世波 刘伟 姚志发 摘【要】 目的 探讨小干扰RNA(siRNA)对大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因表达及干 扰后的T细胞的功能的影响。方法 设计针对目标基因的siRNA，转染大鼠T淋巴细胞，逆转录． 聚合酶链反应((RTPCR)方法检测CD28mRNA水平，MLR检测转染后的T淋巴细胞的增殖能力， ELISA法检测细胞因子水平。结果 siRNA转染大鼠T淋巴细胞后，抑制CD28分子的表达，半定 量RT-PCR检测显示T淋巴细胞CD28的mRNA均有明显的下降，siRNA转染48h后，siRNA．1、 siRNA2·、siRNA-3、siRNA-4组CD28基因表达均受到抑制，其抑制率最高为(88．56±4．70)％，T细 胞增殖能力、IL-2，IFN-~水平明显低于对照组。结论 siRNA可以特异性抑制大鼠T淋巴细胞共 刺激分子CD28基因的转录和表达，降低大鼠T细胞的增殖能力，抑制了IL-2，IFN．细胞因子的分 泌水平。 【关键词】 小干扰RNA；T细胞；CD28；免疫耐受 InhibitoryeffectsofspecialsiIu ontheex[IressionofCD28c0st lIIat0rymoleculeInratlym- phocytes ZHUGuan— ，SUNSh一6D，UWei．TheSecondAffiliatedHospitalofHarbinMedicalCol- lege，Harbin150086．China A【bstract】 Oblective ToinvestigatetheexpressionofCD28constimulatorymoleculeinratlyre— phocytesandtheinhibitoryeffectsofsiRNA．Methods FourdifferentsiRNA weredesignedandsynthe． sized．andtrnasfectedintoratlymphocyteswithcationicliposome ThechnageofCD28mRNAlevelWas determinedbysemi—quna titativeRT—PCR at48hposttrnasfection．Thecellresponsivenessrateswerede． tectedbyMLRmethods．IL一2nadIFN一 cytokinelevelswereassayedbycommercialELISAkitsResults Th eresultSofsemi—qunatitativeRT-PCR assayrevealedCIY28mRNA levelswere inhibitedaftertrnas． fectionindifierentgroups．Andthehi曲estinhibitoryrateWas (88．56±4．70)％．Thecellresponsive— nessratesandIL-2andIFN·cytokinelevelsintrnasfectiongroupwerelowerthna incontrolgroup．Con- clusion siRNA coulddecreasetheexpressionofCD28mRNAnadprotein，nadtheproliferationofratT cells。nadinhibittheIL-2andIFN一 cytokineproduction． 【Keywords】 smallinterfering(siRNA)；Tlymphocyte；CD28； Immunetolernace 同种异体器官移植排斥反应中。T细胞是主要的 联免疫吸附测定 (ELISA)试剂盒购于上海森雄公司， 效应细胞。T细胞的活化、增殖必需辅以APC的共刺