Bcl-2mTOR通路阻断对增加HepG2细胞化疗敏感性的探究.pdfVIP

Bcl．2／roTOR通路阻断对增加nepG2细胞化疗敏感性的研究 中文摘要 Bcl．2／mTOR通路阻断对增加HepG2 细胞化疗敏感性的研究 中文摘要 第一部分表阿霉素对人肝癌HepG2．幺m胞的增殖抑制 目的 寻找表阿霉素引起HepG2细胞早期应激即引起细胞的自身修复时所需的孵育 时间和药物浓度。 方法噻唑蓝(MTD实验检测不同浓度的表阿霉素在不同的孵育时间段里对H印G2 细胞的增殖活性的抑制和IC50(IC 50)。 结果表阿霉素对H印G2细胞的增殖抑制是药物浓度和孵育时间依赖性的，细胞的 IC50为78．14士3．271ag／ml。 结论在应激早期即表阿霉素孵育较短时间(12d,时)，或较小应激即较低浓度的表 阿霉素(40pg／m1)作用时，相关的自噬可能上调，这种孵育时间和药物浓度可以作为 最佳的实验条件，进行下一步的实验。 目的 比较单独ABT737、单独表阿霉素或联合应用对HepG2细胞凋亡和自噬的影响， 并探讨分子机制。 方法采用MTT法测定对HepG2细胞增殖的抑制作用；应用流式细胞技术检测对于 HepG2线粒体膜电位和凋亡的影响，应用MDC荧光染色观察给药后自噬和凋亡的发 LC3 II的蛋白表达水平，明显降低了LC．31的蛋白表达水平。当与表阿霉素(20pg／mL) 中文摘要 Bcl-2／mTOR通路阻断对增加HepG2细胞化疗敏感性的研究 联合应用时，明显比单独应用表阿霉素时增加凋亡率、降低了膜电位，并明显增加了 II／LC3 I比率。 p53、Beclinl的表达，明显增加TLC3 结论 阻断Bcl．2通路可诱导HepG2细胞凋亡和自噬，而联合表阿霉素使用时能够使凋 亡和自噬水平增加，提高HepG2细胞的化疗敏感性。 第三部分 roTOR信号通路阻断对肝癌HepG2细胞化疗敏感性的影响 目的 比较单独雷帕霉素、单独表阿霉素或联合应用对HepG2细胞凋亡和自噬的影 响，并探讨分子机制。 方法采用MTT法测定对HepG2细胞增殖的抑制作用；应用流式细胞技术检测对于 HepG2线粒体膜电位和凋亡的影响，应用MDC荧光染色观察给药后自噬和凋亡的发 结果雷帕霉素(50nmol／L)可随时间延长而抑制肝癌细胞增殖、凋亡率明显增加以 LC3 联合应用时，明显比单独应用表阿霉素时增加凋亡率、降低了膜电位，并明显增加了 LC3II／LC3 I比率以及p62表达。 结论 阻断mTO啪路可诱导HepG2细胞凋亡和自噬，而联合表阿霉素使用时能够使 凋亡和自噬水平增加，提高HepG2细胞的化疗敏感性。 关键词：bcl．2mTOR自噬凋亡化疗 作 者：杜鹏 指导老师：吴浩荣教授 Ⅱ Oil in EnhancedeffectsofBcl一2／roTORinhibitor cells Abstract epirubicin-basedchemotherapyhepG2 EnhancedeffectsofBcl．．2／mTORinhibitoron 。 C in 2 cells．● pirubicin．basedchemotherapyhepG2 Abstract PartIThe inhibitionof