EWS-FLI1融合区及HLA-A0201限制性CTL表位的实验研究.pdfVIP

Y1 摘要 摘要 目的： 胞表位，并进行初步鉴定。 方法： Predep和ImmuneEpi Databaseand tope Analysis 预测的CTL表位进行筛选，并将筛选的表位与HLA—A2．1分子进行动力学模拟。 根据预测、筛选的结果，按标准Fmoc方案合成抗原多肽，并纯化、鉴定。 (2)表位肽刺激的CTL产生颗粒溶素的检测：分离收集健康人外周血PBMC． 鉴定HLA—A2．1阳性表达，进行DC诱导，制备尤文肉瘤冻融抗原冲击致敏的DC (TP—DC)。制备效应细胞。采用ELISA定量测定抗原肽刺激的效应细胞所产生 颗粒溶素(Granulysin)的能力。 (3)效应细胞对靶细胞的杀伤作用的检测：以尤文肉瘤A673为靶细胞， 按不同的效靶比将效应细胞与A673共育，乳酸脱氢酶ELISA检测杀伤率。 结果： l可能的HLA-A2．1 限制性CTL表位，共8个。经多项式方案、量化基序方案进一步筛选，确定其 中4个肽为候选表位肽。 2．应用分子动力学模拟，初步验证了4个候选表位肽与HLA—A2．1分子的结合 力。色谱测定各候选肽的纯度均在以98％以上，质谱分析各肽的分子量与理论值 相符。 3．颗粒溶素释放实验证实筛选的4条表位肽均能产生刺激效应，其中表位 肽QIQLWQFLL。雕吼。。洲的刺激效应最为显著。 4．靶细胞杀伤实验证实筛选的表位肽均能产生杀伤效应，QIQLWQFLL。鹏删． 拟，尤文肉瘤细胞具有较强的杀伤作用，且随效靶比升高，杀伤率递增。 摘要 结论： 1．综合运用多个方案可提高预测效率，分子动力学模拟可初步验证表位肽 与HLA—A2．1分子的结合力。 l 蛋白的HLA—A2．1限制性CTL表位。 关键词：尤文肉瘤；EWS．FLll；CTL表位；多肽合成；分子动力学模拟 HI Abstract ABSTRACT Objective： theHLA-A2．1-restricted CTL derivedfrom Prediciting，screening，andsynthesizing epitopes 1 them EWS·FLIfusion method．． Ewing’sarcoma protein，thenidentifyingbyimmunological Methods： 1 simulationand Epitopesprediction，moleculardynamics synthesis： TheHLA·A2．1restrictedCTL oftheEWS—FLI1 fusion were epitope proteinsynthetically and then the