FGF10在人类胚胎后肠和肛门直肠发育过程中时空性表达的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· FGFIO在人类胚胎后肠及肛门直肠发育 过程中时空性表达的研究 -■上-·_k 刖 昌 成纤维细胞生长因子(fibroblastgrowthfactors，FGFs)是由众多成员组成的一 个超家族。目前在哺乳动物中被鉴定的FGFs已有22种，它们广泛参与了细胞增 殖、细胞迁移及细胞分化过程。其中，成纤维细胞生长因子10(fibroblastgrowth factor 10，FGFIO)为成纤维细胞生长因子家族的重要一员。 动物实验研究显示，在胚胎发育过程中，FGFl0对肠上皮细胞的存活和增殖 起到了至关重要的作用。此外，在尿路上皮的生长、分化和再生中，FGFl0也起 了重要调节作用。Kru ger ofthe malformation，ARM)和泄殖腔外翻(exstrophycloaca，CE)的候选基因。 Fairbanks TJ等研究发现FGFIO基因敲除小鼠表现出严重的肛门直肠畸形，证实了 FGFIO在正常肛门直肠发育过程中发挥了至关重要的作用。 综上所述，FGFIO在动物后肠及肛门直肠形态发生中起到重要的作用，然而， 目前尚无关于FGFl0在人类泄殖腔，后肠及肛门直肠形态发生过程中表达模式的 研究。FGFl0是否参与人类泄殖腔的发育；FGFl0在人类胚胎后肠及肛门直肠的发 育过程中是否发挥作用尚不清楚。因此，为了明确FGFIO在人类后肠及肛门直肠 形态发生过程中的表达方式及可能的作用，我们应用免疫组化的方法系统的研究 FGFl0在人类肛门直肠发育的关键期即胎龄3～8周的时空表达方式。 实验方法 一、标本 1、本研究遵守赫尔辛基宣言，并得到中国医科大学附属盛京医院伦理委员 发育正常的人胚胎标本 会批准(NO．200(7)PSl4)。收集因意外妊娠而人工流产， 85例(每例标本均取得产妇本人同意)。根据产妇末次月经时间、超声所测胎儿双 顶径和人胚胎形态学特征等确定胎龄为3～8周。标本经O．01MPBS液冲洗后立即 置于4％多聚甲醛磷酸盐缓冲液中4C固定12小时--24小时，常规脱水，石蜡包 埋，进行矢状面连续切片，厚度4¨m。 7．4)冲洗后，4％多聚甲醛 2、标本立即经PBS(phosphate—bufferedsaline；pH 固定，常规方法脱水，制备蜡块，行矢状面连续切片。 二、试剂 (1)FGF．10多克隆抗体购自美国SantaCruz公司： 多聚赖氨酸、DAB显色剂等购白博士德生物技术开发有限公司。 三、方法 通过免疫组化染色试验方法连续观察FGFl0在人类胚胎泄殖腔、尿生殖窦以 及肛门直肠时空性表达模式。 馇 里 当日7I写 第3周时，尚未出现典型的泄殖腔(cloaca，CL)形态，免疫组化显示未见明显 FGFl0表达。 第4周时，典型的泄殖腔形态已出现，U型的尿直肠隔(urorectalseptum，URS) 将泄殖腔分隔为腹侧的尿生殖窦(urogenitalsinus，UGS)和背侧的原始直肠／后肠 表达在泄殖腔膜(cloacal 阴性。 第5周时，URS继续下降，其顶端与CM的距离逐渐减小。此时FGFl0仍大 量表达于URS顶端、背侧上皮及泄殖腔膜，但FGFl0免疫组化反应强度较第四 周弱。同时，后肠开始出现大量表达。而URS腹侧上皮处免疫反应几乎阴性。 第6周时，泄殖腔URS背侧顶端上皮FGFl0免疫反应仍然持续强阳性，但 2 腹侧上皮FGFl0免疫组化反应仍为阴性。 第7周时，CM破裂后，肛门直肠及UGS与羊膜腔相通，FGFl0阳性细胞在 肛管上皮消失，但尿道上皮出现FGFl0阳性细胞。 第8周时，