PEG修饰人重组粒细胞集落刺激因子的制备工艺及性质的分析研究.pdfVIP

2 万方数据 摘要 粒细胞集落刺激因子（granulocyte colony stimulating factor ，G-CSF ）是一种 谱系特异性生长因子,主要功能为促进嗜中性粒细胞的产生和分化。其作为药物 主要应用于由于接受化疗而导致中性粒细胞减少的病人，有效提升病人体内的白 细胞数量，增强病人的免疫力。类似于很多蛋白质药物，rhG-CSF 体内半衰期短， 易被酶水解和肾消除，因此实际应用时需要多次注射维持血药浓度。聚乙二醇化 是一种对蛋白质药物进行PEG 共价修饰的技术，通过增加蛋白质药物分子的流 体动力学体积，减少了肾清除，从而延长了蛋白质药物的血浆半衰期。本文的研 究致力于PEG-rhG-CSF 的制备工艺，在保持rhG-CSF 活性的同时延长其体内半 衰期。 本文的研究主要包括以下几个方面： 1、rhG-CSF 在大肠杆菌中表达多以包涵体形式存在，而外源蛋白形成的包 涵体必须经过变性、在折叠复性，才能得到有活性的蛋白产物，因此，包涵体的 复性成为大规模制备 rhG-CSF 的关键技术之一。本研究针对影响包涵体复性的 因素，包括pH 值、温度、尿素含量、反应时间等进行考察优化。同时，摸索复 性液配方中尿素浓度，精氨酸浓度，氧化型/还原型谷胱甘肽比例，甘油所占比 例，以提高包涵体的复性效率。 2 、由于rhG-CSF 易被酶水解和肾消除，因此体内半衰期短。本研究采用PEG 修饰的方法扩大rhG-CSF 分子的流体动力学体积，在不影响rhG-CSF 活性的同 时，增大其体内半衰期，并对修饰后分子的活性进行检测。 3、制备的PEG-rhG-CSF 由于分子结构和理化特性有些微改变，因此其保存 条件与原型相比要做出改变。因此，选择对温度、pH 值，缓冲液成分、赋形剂 选择等条件，并结合各种强制降解实验，对制备的 PEG-rhG-CSF 进行稳定性检 测，最终得到该蛋白最适合的保存条件。 经过该论文的研究，成功制备并纯化了rhG-CSF 和PEG-rhG-CSF，并对两者 的生物活性及后者的稳定性进行研究，实现了 rhG-CSF 的长效化，为长效化 rhG-CSF 药物的研发提供数据支持。 关键词：rhG-CSF，PEG ，复性，修饰，稳定性 I 万方数据 Abstract Granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) is a kind of lineage-specific growth factor that primarily influences the production and differentiation of neutrophils, and its use in medicine sometimes results in shortened periods of neutropenia in patients receiving intensive chemotherapy. Like many therapeutic protein drugs, because of enzymolysis and renal clea