Reelin调节小鼠喙端迁移流发育的形态学探究.pdfVIP

II 摘 要 神经干细胞指的是一类特定的干细胞，它具有自我更新能力，通过非对称分裂方式 产生其他细胞从而生成神经组织。神经干细胞的孵育成熟、迁移和分化与中枢神经系统 的发育息息相关，对于理解神经系统发育、损伤及其修复机制至关重要。神经干细胞的 增殖、孵育成熟是个体生长发育的基础；神经干细胞的定向迁移是胚胎神经系统发育的 先决条件，个体发育以及组织损伤修复都依赖于干细胞的定向迁移；细胞迁移到特定的 部位受到一系列的分子信号的调控而后分化为特定的细胞发挥其功能，神经干细胞的分 化为个体不同器官的形成、发育及各个功能的完善提供了必要条件。目前已确定的细胞 迁移方式有两种：放射状迁移和切线迁移。Doetsch 认为喙端迁移流（Rostral Migratory Stream, RMS ）是由室管膜下区（Subventricular Zone, SVZ）的迁移细胞从后至前贯穿于 整个侧脑室外侧壁汇聚而成，RMS 是SVZ 神经干细胞向嗅球部位迁移所经过的高度受 限通道。RMS 作为细胞切线迁移的典型代表，是研究切线迁移的最佳模型。Reelin 蛋白 是细胞迁移起始与停止的调节信号，载脂蛋白 E2 受体（Apolipoprotein E Receptor 2, ApoER2 ）和极低密度脂蛋白受体（Very Low Density Lipoprotein Receptor, VLDLR ）参 与Reelin 信号通路，Reelin 蛋白与二者相结合，诱导胞内效应器Dab1 磷酸化，从而使 迁移的细胞从其支架—放射状胶质细胞纤维上脱落，按照 “inside-out ”模式迁移定位， 形成皮质的六层结构。作为调节细胞迁移的重要信号，Reelin 对神经细胞迁移、皮质片 层化形成和大脑皮质发育起着非常重要的作用。Reelin 蛋白合成或分泌障碍甚至异常都 将导致一系列的精神系统疾病，比如精神分裂症、颞叶癫痫症及自闭症等等，因此了解 Reelin 对神经系统发育的影响有着一定的基础意义，对精神系统疾病的治疗有一定的临 床指导意义。 长期以来，人们对 Reelin 信号通路在放射状迁移中的作用进行了大量研究，但是 Reelin 信号通路在RMS 发育中承担的角色尚不清楚。因此，我们采用野生型（Wild Type, WT ）小鼠和 reeler 小鼠作为实验动物，应用免疫组织荧光技术、墨汁灌注技术及电镜 技术，标记并观察神经干细胞、胶质细胞以及血管发生之间的相互关系，比较两组小鼠 RMS 发育情况。 III 目的：探讨小鼠室管膜下区神经干细胞孵育成熟的微环境及其结构以及神经干细胞 沿RMS 切线迁移至嗅球(Olfactory Bulb, OB)并在嗅球分化整合的过程，尤其是Reelin 对细胞迁移和细胞分化的影响。 方法：选用50 只WT 小鼠和23 只纯合reeler 小鼠胚胎16 天至生后90 天的各年龄 点小鼠大脑共计73 只，应用Evans blue 脑室注射技术标记神经干细胞的动态迁移，采 用免疫荧光技术、墨汁灌注技术及电镜技术，标记并观察小鼠大脑的神经干细胞、胶质 细胞以及血管发生之间的相互关系，比较两组小鼠RMS 发育情况。 结果：①胚胎后期至出生早期，在 SVZ 分布着大量的胶质细胞、神经干细胞和血 管网，它们相互联系构成 SVZ 神经干细胞孵育的血管龛；②神经干细胞在血管龛孵育 成熟后，可以进入 RMS ，切线迁移至嗅球，到达嗅球后转变为放射状迁移，向四周分 化为各类神经元整合入嗅球形成嗅球的各层结构。神经干细胞在RMS 的迁移过程中， 放射状胶质细胞协同血管为其提供引导支架；③Reeler 小鼠的神经干细胞增殖区及细胞 分化与WT 小鼠是相似的，reeler 小鼠也能形成RMS ，但形态有所改变，主要在嗅球处， 神经干细胞失去规律排列，呈散乱分布。Reeler 小鼠血管发育紊乱主要表现在分支增多， 走向杂乱。 结论：室管下区的血管龛（niche ）是神经干细胞的主要来源，血管龛为神经干细胞 的增殖和成熟提供了稳定的微环境；血管协同放射状胶质细胞为RMS 中的神经干细胞 提供支架引导作用；作为调节细胞迁移的重要信号，Reelin 可以通过其交互作用影响血 管的发育，Reelin 缺失