复方地黄在PD大鼠模型中的神经保护作用和可能机制探讨.pdfVIP

温州医学院硕士论文 复方地黄在PD大鼠模型中的神经保护作用及可能的机制探 讨 中文摘要 目的： 探讨复方地黄对6-OHDA单侧损毁的PD大鼠模型中的多巴胺能神经元的保护 作用，以及可能的作用机制。 方法： 将清洁级雄性SD大鼠30只，体重140～150克，随机分成3组，分别为对照组 后处理组(NS+6—0册A+复方地黄)。造模前三周复方地黄预处理组每日给予复 方地黄汤灌胃(剂量2ml／d)；对照组及复方地黄后处理组每日给予等量生理盐 水灌胃。三周后行脑立体定向注射，3组每只大鼠均于右侧MFB注射6-OHDA溶液 (含O．02％vitC)15ug造模。造模后，后处理组每天给予复方地黄汤灌胃两周(剂 量2ml／d)；对照组和复方地黄预处理组每日给予等量生理盐水灌胃两周。造模 后连续四周周末定期行阿朴吗啡(APO)诱导的旋转行为测试。造模后第四周末 处死动物，分离中脑和纹状体待检。检测指标：1．免疫组织化学检测酪氨酸羟化 酶(TH)阳性细胞数。2．高效液相色谱法测定各组大鼠纹状体多巴胺(DA)含 量。3．免疫组织化学检测蛋白激酶ca(PKcQ)多巴胺能神经纤维表达。4．免疫 组织化学检测蛋白激酶C6(PKC6)阳性细胞表达。 结果： 1．APO诱导的行为学结果： 第四周时复方地黄预处理组平均旋转(234．6±14．5次／30min)与对照组平 学差异(PO．01)。 2． TH免疫组化染色及TH阳性细胞计数结果： 组内损毁侧与未损毁侧比较：对照组损毁俱tJTH阳性细胞数(52．9-+2．2个) 个)比较，明显减少，有显著统计学差异(t=34．716，P0．01)：复方地黄后处 2 温州医学院硕士论文 显著统计学差异。 ． 组间未损毁侧的比较：三组未损毁侧之间比较均无统计学差异。 组间毁损侧的比较：复方地黄预处理组与对照组比较，预处理组TH阳性细胞 数有所增多，有统计学差异(PO．05)；复方地黄后处理组与对照组比较，后处理 组TH阳性细胞数也有所增多，有显著统计学差异(尺O．01)。复方地黄预处理组 与复方地黄后处理组比较，无统计学差异(P=o．821)。 3．肌LC测纹状体内DA含量结果： 组内毁损侧与未毁损侧比较：对照组毁损侧纹状体DA含量(51．75±8．61 ng／m1)与未损毁侧(948．4-+121．09ng／m1)比较，明显减少，有显著统计学差 ng／m1)与未损毁侧(931．4-+168．99ng／m1)比较，明显减少，有显著统计学差 异(t=5．510，PO．01)。 组间未损毁侧的比较：三组未损毁侧之间比较均无统计学差异。 组间毁损侧的比较：复方地黄预处理组与对照组比较，DA含量提高，有统计 学差异(PO．05)；复方地黄后处理组与对照组比较，DA含量提高，有统计学差 异(PO．05)。复方地黄预处理组与复方地黄后处理组比较，无统计学差异 (P=O．931)。 4．PKCa免疫组化染色结果： 定性观察纹状体内的多巴胺能神经纤维的PKCa表达情况。结果显示：对照 组未损毁侧基本显黄色染色，神经纤维形态大小正常，镜下可见少许PKca表达 的多巴胺能神经元；对照组损毁侧显色最浅呈浅黄色，神经纤维明显缩小；而复 方地黄预处理组与复方地黄后处理组损毁侧明显深棕色染色，神经纤维形态大小 基本正常。 5．PKC5免疫组化染色结果： 定性分析：黑质内PKC5阳性细胞在三组未损毁侧基本表现为棕黄色染色， 细胞胞质染色所占面积中等。复方地黄预处理组和复方地黄后处理组损毁侧基本 表现为浅黄色一黄色染色，细胞胞质染色所占面积少；对照组损毁侧基本表现为 深棕色染色，细胞胞质染色所占面积大。 半定量分析：采用PKC5阳性细胞换算计分统计：1．组内损毁侧与未损毁侧 3 温州医学院硕士论文 复方地黄后处理组损毁侧(68．9±1．58)与未损毁侧(85．5±1．39)比较降低， 侧之间比较均无统计学差异(P0．05)。3．组间损毁侧比较：复方地黄预处理组 与对照组比较降低，有显著统计学差异(P0．01)，复方地黄后处理组与对