宫颈癌原代细胞的分离和肿瘤干细胞标记物的检测.pdfVIP

摘要 宫颈癌原代细胞的分离及肿瘤干细胞标记物的检测 硕士研究生 白晶 导师 李爱军 郑州大学第一附属医院妇产科 中国郑州450052 摘要 背景与目的： 宫颈癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤之一，尽管人类从未停止过对宫颈 癌的研究，并取得了很大突破，但是宫颈癌仍是严重威胁广大妇女身心健康的 危险因素之一。随着肿瘤干细胞学说的兴起，宫颈癌干细胞的研究也逐渐起步， 研究人员试图通过寻找宫颈癌干细胞为宫颈癌的诊治开辟新路。标记物的研究 是宫颈癌干细胞研究的前提，目前已发现了一些可能成为肿瘤干细胞的标记物， 如CD44、CD24、CDl33、ABCG2等，但这些标记物是否可以成为宫颈癌干细 胞的标记物，仍需要更多的研究来证实。本研究结合目前肿瘤干细胞的研究成 果，对宫颈癌原代细胞进行分离和培养，并采用流式细胞仪检测肿瘤干细胞标 记物CD44和CD24在宫颈癌原代细胞中是否有表达，同时检测其在外周血中的 表达：此外，本实验采用免疫组化和免疫荧光双染法定位检测两种标记物在宫 颈癌中的表达，以丰富实体瘤的研究。 ，：三 方法： A～IIB 院行妇科手术的宫颈癌患者标本(包括癌组织和外周血)，临床分期(I Fed训ionof a11d 期)16例，按国际妇产科联盟(Int锄ationalGyllecology obstetrics，FIGO)分期标准：IA期4例、IB期5例、IIA期4例和lIB期3例。 癌组织病理类型为浸润性鳞状上皮癌，患者中位年龄56岁(32～71岁)；同期河 南省郑州大学第一附属医院妇科行子宫全切术的正常宫颈组织lO例作为对照； 摘要 患者中位年龄43岁但6～63岁)。首先应用蛋白酶消化法分离宫颈癌组织，然后 用肿瘤干细胞培养液培养分离出的悬浮细胞，培养一段时间后，因原代细胞杂 质较多，再用淋巴细胞分离液分离可得到较为纯净的细胞球。外周血的分离采 用淋巴细胞分离液分离以获得单个核细胞；然后应用流式细胞仪检测肿瘤干细 胞标记物CD44和CD24在宫颈癌原代细胞及外周血中的表达情况，最后应用免 疫组化和免疫荧光双染的方法检测CD44和CD24在宫颈癌组织的表达情况。 结果： 1．宫颈癌原代培养过程显示：采用蛋白酶消化法和肿瘤干细胞培养液培养能 得到宫颈癌悬浮细胞球；但在正常宫颈组织无法得到悬浮细胞球。 2．流式细胞仪检测肿瘤干细胞标记物CD44和CD24，结果显示在宫颈癌悬 单阳，cD44+cD24+双阳的细胞群；但在正常宫颈组织和健康对照者外周血中无 CD44和CD24的表达。 ≥。免疫组化显示：CD44和CD24表达于宫颈癌组织，但在正常组织中无表 达，差异有统计学意义。免疫荧光双染显示：CD44和CD24可同时表达于宫颈 癌细胞表面。 结论： 1．采用蛋白酶消化法和肿瘤干细胞培养液培养可得到宫颈癌悬浮细胞 球。 2．肿瘤干细胞标志物CD44和CD24在宫颈癌组织和外周血中有表达，但 在正常对照组无表达。 关键词】宫颈癌；肿瘤干细胞；CD44，CD24；肿瘤干细胞标记物； II cancer the cellsfromcerucal Isolationof primitive CeUceUmarkersmarKerS andandidentificationldennnCanon0IofCanCerca