宫颈癌组织中RASSF1A基因的甲基化状态和其临床意义.pdfVIP

摘要 宫颈癌组织中RASSFlA基因的甲基化状态及其临床意义 研究生 王琳 导师 乔玉环 郑州大学第一附属医院妇产科 郑州450052 摘要 背景与目的 宫颈癌是威胁全球女性健康的第二大妇科恶性肿瘤，在发展中国家其发病率 位居妇科肿瘤首位，且近些年来具有年轻化趋势。据估计，在全球范围内每年 宫颈癌新发确诊病例约49万，死亡人数约27万：现已证实HPV感染是宫颈癌 发生的必要条件，但是仅有HPV感染不足以使J下常细胞转变为肿瘤细胞。近些 年来，表遗传学的修饰在肿瘤形成过程中的作用成为目前研究的热点，其主要 包括DNA甲基化和组蛋白去乙酰化。由于基因启动子区甲基化是肿瘤发生的早 期事件，并在多种肿瘤的癌前病变中经常出现，因此DNA甲基化有可能成为肿 associateddomain 瘤早期诊断的分子生物学方法。RAS相关区域家族1A(Ras family1A，RASSFlA)基因是一种肿瘤候选抑癌基因，其启动子区甲基化与多种 人类上皮性肿瘤的发生有关，如肺癌、乳腺癌、胃癌、食管癌等。本研究通过 检测宫颈癌组织中RASSFlA基因启动子区甲基化状态及其蛋白表达情况，以分 宫颈癌发生的关系，为宫颈癌的发病机制和早期诊断提供理论依据。 材料和方法 1研究对象 摘要 织学分级：G1-，G239例，G321例；伴有淋巴结转移者7例。患者中位年龄 42岁(25～67岁)。所有标本均经病理检查确诊，术前未接受放、化疗。另选 取正常宫颈组织15例作为对照。将每一份标本均分为两份，一份切下后立即置 冰盒中，然后转入一80℃冰箱保存；另一份用4％甲醛溶液固定，常规石蜡包埋， 用于免疫组织化学染色。 2实验方法 2．1甲基化特异性PCR(MSP) MSP的基本原理是基因组DNA经亚硫酸氢盐处理后，所有发生甲基化的胞 嘧啶不产生脱氨基反应，而未发生甲基化的胞嘧啶(C)发生脱氨基反应变为尿嘧 啶(U)。基于此种碱基的改变，分别设计出甲基化和非甲基化特异性引物，再结 合PCR扩增就可以将甲基化和非甲基化基因区分开来。 2．2免疫组织化学染色 采用卵白素一生物素一辣根过氧化物酶复合物法即ABC法检测RASSFlA蛋 eBioscience公司)。 3统计学分析 所有数据采用SPSS 16．0软件包进行处理。f检验、Fisher精确概率法、 口’=O．017。 结果 lRASSFIA基因的甲基化状况及其与宫颈癌临床病理特征的关系 15例正常宫颈组织中未见RASSFIA基因甲基化，60例宫颈癌组织中有2l 宫颈鳞癌的RASSFlA基因甲基化率明显高于宫颈腺癌(尺0．05)；临床I期、 (乃0．05)。 2RASSFIA蛋白的表达情况及与RASSFIA基因甲基化的关系 正常宫颈组织中均有RASSFIA蛋白的表达，而宫颈癌组织中蛋白阳性表达 摘要 分级和淋巴结转移无关(侈0．05)。 表达之间呈负相关(，=一0．500，P0．05)。 结论 基因有纯合型甲基化和杂合型甲基化两种形式，提示RASSFlA基因甲基化与宫 颈癌的发生有关，且是宫颈癌的频发事件。 2RASSFlA基因启动子区的异常高甲基化多见于临床分期晚的宫颈鳞癌组织 中，提示RASSFlA基因甲基化可能与宫颈癌细胞的浸润和转移有关。 重要机制之一。 【关键词】宫颈癌RASSFlA甲基化甲基化特异性PCR免疫组织化学 Abstract The andProtein ofRASSFIAGene Methylation Expression ●J—_ ● ■J叫 ● lnL：er