成体内源性神干细胞的MRI活体示踪.pdfVIP

中山大学硕士论文 中文摘要 成体内源性神经干细胞的MRI活体示踪 专 业： 影像医学与核医学 硕士生： 钟小梅 指导教师： 沈君主任医师 中文摘要 研究背景 stem 神经干细胞(neuralcells，NSCs)的应用为中枢神经系统神经再生和功 能重建提供了全新的治疗思路。目前应用NSCs修复中枢神经系统损伤主要有移 植外源性干细胞的“替代治疗”策略和激活内源性干细胞的“补充治疗”策略两 种。内源性NSCs因具有来源稳定可靠、无伦理道德问题、无免疫排斥反应等多 种优势而成为当前的研究热点。M对是目前理想的干细胞活体示踪分子影像技 术。但MRI示踪技术目前主要用于外源性干细胞的活体示踪，对内源性干细胞 的示踪鲜有报道。 研究目的 探讨利用靶向性磁纳米微粒实现成体内源性神经干细胞MRI靶向示踪的可 行性及持久性。 材料方法 1．成体NSCs的分离、培养及鉴定 健康成年C57BL／6J小鼠，取脑，吹打成单细胞悬液，用抗CDl5免疫磁珠 2、 分选后，悬浮细胞培养法，对NSCs行Nestin、CDl5鉴定及诱导分化后MAP GFAP和04鉴定。 中山大学硕士论文 中文摘要 2．靶向磁珠的弛豫特性及体外试验 抗CDl5微型磁珠行扫描电镜检查，了解其大小、形状等。原子吸收光谱法 测定其平均铁含量。M对扫描测量其他弛豫时间及弛豫率。抗CDl5磁珠与NSCs 孵育后，MⅪ扫描观察细胞信号强度改变，原子吸收法测定细胞平均铁含量， 透射电镜及普鲁士蓝染色观察纳米微粒在细胞中的分布。抗CDl5磁珠与脑组织 切片孵育后，加入相应荧光二抗，荧光显微镜观察了解纳米微粒在脑内的分布。 3．正常小鼠内源性NSCs的MRI活体示踪及病理检查 29只正常成年C57BL／6J小鼠随机分为三组：靶向组11只，非靶向组9只， 单纯抗体组9只。于立体定位仪引导下向侧脑室内分别注射抗CDl5磁珠、单纯 磁珠及单纯抗体，于注射后ld、3d、7d、10d进行系列小鼠脑部M酣检查，观 察各组小鼠脑信号强度改变，并利用正常脑实质信号强度对低信号改变区域的 T2枣信号强度进行校正，比较各组各时间点上的校正T2*信号强度的差异。 脑室注射后各时间点上各组随机选取一只小鼠，M对扫描后取脑，制成石 蜡切片，分别进行CDl5、Nestin双标记的免疫荧光检查，并进行普鲁士蓝染色， 与M对所观察到的改变进行比对，了解MⅪ靶向示踪的可靠性。 4．统计学分析 计量资料以均数4-标准差(i虹)表示。体外实验的靶向组、对照组细胞T2 弛豫时间之间的比较使用单因素方差分析进行检验。活体实验各组图像上各时间 点的校正T2幸信号强度之间的比较采用重复测量资料的方差分析比较。统计学分 析使用SPSS16．0软件，检验水准为P0．05。 结果 1．成体NSCs的分离、培养及鉴定 抗CDl5磁珠分选后的细胞悬浮生长，呈神经球形态，免疫荧光鉴定Nestin 及CDl5阳性，分化后GFAP、MAP2及04阳性。 2．靶向磁珠的弛豫特性及体外试验 l 抗CDI5磁珠粒径平均约73．77+10．1nm左右，铁含量为10．589mol／ml，T2 mol。1·s．1。 弛豫率为0．43×106 NSCs与靶向磁珠孵育后，与对照组细胞相比，其在T2WI及T2*WI上信号 明显降低，T2时间缩短。靶向组的T2值与对照组间均有明显统计学差异 U 中山大学硕士论文 中文摘要 (p，o．001)。原子吸收光谱检测示平均每个细胞的铁含量为19．279pg；电镜示细 胞膜上可见致密