沉默TAK1表达对三氧化二砷作用Kasumi-1细胞凋亡的探究.pdfVIP

THE AFFECT OF TAK1 GENE SILENCING ON THE APOPTOSIS OF KASUMI-1 CELLS INDUCED BY ARESENIC TRIOXIDE A Dissertation Submitted to the Graduate School of Henan University in Partial Fulfillment of the Requirements for the Master s Degree of Science By Xu Jinxia Supervisor: Prof. Wei Xudong April, 2013 4 摘 要 第一部分 CCK-8 法检测As O 作用kasumi-1 细胞株细胞增殖情况 2 3 目的：筛选出作用于kasumi-1 细胞株的最佳As O 浓度，为后期实验的药物作用浓 2 3 度提供依据。 方法：采用浓度为0µmol/L、0.5µmol/L、1µmol/L、2µmol/L、5µmol/L、10µmol/L、 20µmol/L 的As O 分别作用于Kasumi-1 细胞0h、2h 、6h、12h、24h 、48h 、72h 。CCK-8 2 3 法检测As O 作用kasumi-1 细胞后细胞的增殖情况，绘制药物作用后细胞的生长曲线， 2 3 计算药物作用的IC50 值。 结果：As O 作用后，细胞增殖抑制率呈浓度依赖性，和时间相关性不大，IC50 值 2 3 为3.5μmol/L 。 结论：后期实验选择As O 作用浓度为2µmol/L。 2 3 第二部分 脂质体介导法转染kasumi-1 细胞株转染条件的优化及siRNA 筛选 目的：筛选沉默效果最佳的siRNA 。 方法：以TAK1 作为靶基因，设计出4 条siRNA 序列，从有无血清、转染时间、 脂质体剂量、siRNA 剂量四个方面优化转染效率。采用实时定量 PCR 和 Western Blot 的方法检测siRNA 作用后，TAK1 基因在mRNA 和蛋白质水平上的变化。 结果：TAK1siRNA转染kasumi-1细胞在无血清和有血清时比较，转染效率分别为 (75.48±1.07 ）%和(61.66±0.74 ）%，P=0.000 ，差异有统计学意义；siRNA剂量为20pmol ， Lipofectamine2000为1.0ul下，转染时间分别为1h、2h 、4h 、6h 、8h、12h时，转染效率 分别为（28.37±1.01 ）%、（47.71±0.93 ）%、（45.42±1.26 ）%、（51.68±1.28 ）%、（52.42±0.91 ）%、 （33.31±1.25 ）%，6h和8h时，转染效率比较P=0.433 ，差异无统计学意义。其余各组之 间P ＜0.007，差异有统计学意义；PCR及Western Blot结果显示：siRNA3作用组，TAK1 在mRNA和蛋白表达上最低。 结论：在无血清、转染6或8小时、脂质体剂量/siRNA为20pmol/1µl时，转染效率最 I 高。siRNA3沉默效果最佳。 第三部分 封