河北食管鳞癌患者中P53基因第4外显子72密码子ArgPro的多态性和相关发病因素研究.pdfVIP

：量步一铸j参 多态性及相关发瘸因素研究 摘 要 目的：食管癌足发生在食管上皮组织的恶性肿瘤，在全世界最常见的 恶性肿。嗜中位居第八钽，其每年大约有500，000新发病例，一i所有恶性 肿瘤的2％。其预后五年生存率不到5％。食道癌在中国有明显的地理聚 集现象，高发病率及高死r：率地区相、刍集巾，特别是在河北磁县地区，发 瘸率高达103．5／10万。导致食铃：：幅发病的十目天因素：舒很多，例如亚硝胺类 化合物，霉菌毒祟等。随青分子生物7≯的兴起，：囱‘关癌基因研究在学界成 为r热点内容。众所岗矢l|，p53：基阑足抑癌基冈，在人类?卜数以』：的肿瘤 常高。p53蛋白的功能和结构容易收剑该基ix_j部分多态性位点影响，因此 与肿瘤的易感性有关。根据目j，』．幽内外的研究情况来看，位于p53基因第 四外娃子控制细胞的生长抑制和凋亡，p53的N端区域包含r一个富含脯 含最降低所必须的区域。这个区域包含5个SH3结合的PXXP模体的区 域，这可能和一些信号转到途径中的网子有物理性作用。p53基因第72 密再f5：产的Arg代替Pro后去除了～个PXXP模体。这增加rp53的不稳定 。rk-，从而导致第72位密码子的多态性具有艰强的连锁不平衡性。但不同 民族、不同地域，其易感基因型可能0同。故本研究选用第72位密码子 作i为研究位点。 由于河北省(特别是磁县)是食管癌高发区，所以本研究旨在探讨 iE常人群分布情况比较分析，以及对食管癌患者发病的相关因素调查研 究。从而为食管癌的预防及发病机理提供依据。 方法： 1基本研究方法：本实验采用病例对照研究方法 2标本来源：病例组：食管癌组织取自2010年11月．2011年11月期 问在河北医科大学第四附属医院就诊的50例食管癌患者新发病例手术切 ’ j：喳．粤 眩Ki‘。列※㈡．：5ip?㈡■∥“：一：．：_‘再㈦；∞也眨!】键i．点个体。：仔扶蛾人身 ．}：取活捡标本和典型部位切除下米的切片放入RNAlater液中迅速冷冻。 同刚‘，还通过问卷的方式来详细获得已知的诱发食管癌的危险因素，诸如 吸烟，饮酒，吸毒，饮食以及外在的暴露因素，如：木屑，工业油漆等等。 在征得患者本人或其家属同意后，在无菌操作环境下取新鲜食管鳞癌组织 和正常食管黏：漠组织。 tissueDNA 3组织DNA提取：使用Qiagencolumns来从组织中提取 DNA。 ， 4P53笫72密码子的多态性检测：根据第四外显子中的第72密码 增。分别利用两对引物做两管iF行PCR检测两个等位基因。PCR反应在 AB公司的PCR扩增仪中进，亍。反应体系总共为20／al，其中包括：白色体 DNA 对扩增产物进行电泳。选择20bp marker平行电泳，在紫外灯下观察 处产生一个片段，杂合子Arg／Pro则分别产生上述两种片段。计算各基因 型，各基因型频率用X2，险验，显著性检验水准为O．05。 5调查问卷：根据可能的食管癌历发因素，分别对食管癌组及对照组 制定详细的调查问卷内容，通过使用SPSS软件分析数据，从中找出食管 癌发病的相关因素。其中吸烟阳性组条件为每年吸烟100支以上，饮酒阳 性组为每周饮白酒100ml以上，热饮阳性组为每日饮热饮一次以上，生活 环境为在某地生活lO年以上。 结果： 1通过：恃食管鳞癌组和对照组的基因频率进行哈温均衡性检验，显示 病例组与对照组的构成无明显差别。P0．05 2在河北地区食管癌患者中p53Arg／arg纯合子基因型的频率为 对照组一卜述三种基因型频率分别为，12％，52％，36％。两者相比具有显 P0．05) 著性差异(Z2=10．607 3在河北地区，通过调查问卷了解50例食管鳞癌患者及50例健康对 中丈持导 潮+fj‘48例：占食管癌，LF确