急性心理应激对胃肠功能影响初步得研究.pdfVIP

成急性心理应激模型，观察大鼠胃肠粘膜形态改变，并通过检测血浆DAO和血 浆D．乳酸浓度研究其肠道屏障功能改变。 另外，急性心理应激可对消化道动力产生明显影响。已有的证据表明，急性 心理应激可导致胃排空下降，而导致结肠排空增强，对于小肠动力的影响则尚有 争论13，14，15。因此，本研究还初步评价了急性心理应激中结肠运动的变化。 二实验方法和材料 (一)动物处理 1实验动物 健康成年雄性Wistar大鼠，购自中国医学科学院实验动物研究所，喂养于 水。实验前适应性喂养一周。 2束缚应激方案 本实验遵循北京协和医院实验动物管理委员会的规定。 ． 2．1应激模型的建立：采用自制束缚装置，固定大鼠头部和四肢。观察3小时， 其间禁食禁水。3小时后将其释放，计数大鼠排便颗粒数。通过观察大鼠排尿、 排便颗粒来判断应激成功与否。所有动物束缚应激都在8am．12am之间进行，以 统一动物生理周期的影响。 2．2大鼠束缚装置的制作：根据Garcia等的方法改良16；根据大鼠体型，自制束 缚装置：(图1) 底木板：45X30X2cm长方形，在板 l l 前端10cm处两侧做两立板，以短 -1 f、 r ’ _J O6。4 p L 边中线为轴，距板前端llcm处离 l 13_ 1 轴6cm处左右各钻一直径1．5cm圆 ．鼍 孔，距板前端24cm处离轴6cm处 O b 左右各钻一直径1．5cm圆孔。 头板：28X10Xlcm，长边中心刨出 4X3．5cm半圆头孔，靠螺钉固定于 底板。 6 四肢固定柱：做成20cm长圆台状，细端沿中线开出底大上小夹缝。 另外制作不同大小头板调节板。 3分组方案 3．1束缚组：55只大鼠经过3小时束缚后随机分入4组：A组(3小时即时处死 处死组)14只，D组(束缚后休息21小时处死组)13只。 3．2对照组：额外增加E组(经过简单抓放，禁食禁水3小时)13只作为禁食 禁水对照组。 3．3入组标准： 纳入标准： 1．)健康雄性成年wistar大鼠 2)购入时体重240～2609 排除标准： 1)存在腹泻及其他明显可判断的消化系统疾病 2)束缚过程出现严重躯体损伤者，此严重躯体损伤包括缺氧、肢体残缺、神经 损伤。 3)在入组动物中，个别动物采集标本或者处理标本失败时，则仅剔除该动物相 应数据，该动物其余指标的数据仍保留进入统计。 3．4实验动物基本资料统计 动物购入后喂养观察期间未发现明显腹泻、消瘦等疾病状态。 剔除动物过程详见结果部分。最后入组各组动物资料见表l。 表1大鼠基本资料(X±SD) 7 4标本采集及处理 4．1主要试剂和仪器 无菌手术器械包北京协和医院实验动物中心供应 一次性采血针BD公司 中性福尔马林(10％福尔马林)北京化学试剂公司 保存液(70％甘油+l5％无水酒精+l5％双蒸水) 戊巴比妥钠Merck公司 4．2手术方法：在各时间点用3％戊巴比妥钠按45mg／kg体重腹腔注射麻醉大鼠。 使用络合碘消毒腹部皮肤，沿腹中线切开腹部皮层至剑突下约5cm，络合碘消毒 皮下组织，铺无菌巾，无菌操作进入腹腔。 4．3血液标本采集及处理：经门静脉取