红霉素预适应在局部缺血再灌注中对线粒体细胞色素c的作用.pdfVIP

目录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………．．1 英文论著摘要………………………………………………………………………5 二、英文缩略语………………………………………………………………………．9 三、论文………………………………………………………………………………10 —1L．h 日U舌…………………………………………………………………………………………………………10 材料和方法………………………………………………………………………．11 实验结果…………………………………………………………………………．15 讨论…………………………………………………………………………………………………………20 结论…………………………………………………………………………………………………………21 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………22 五、参考文献…………………………………………………………………………．23 六、附录 综j苤…………………………………………………………………………………………………………25 在学期间科研成绩………………………………………………………………33 致谢…………………………………………………………………………………………………………34 个人简介…………………………………………………………………………35 缺血／ ／再灌 、，器 红霉素可以通过干扰线粒体的能量代谢从而模拟缺血诱发预适应的保护作 c是第一种被发现的线粒体释放的促凋亡蛋白。 用，产生红霉素预适应现象。Cyt C作为应激传感器被释放到胞质中，从而引发细胞执行凋亡 在线粒体损伤后，Cyt c发挥了关键性作用。本实验的目的，红霉素预适应作用 程序，在此途径中Cyt c促凋亡因子改变的多少，判断红霉素是否作用于线粒体，产生的 下，根据Cyt 效果。 方法 一、实验动物及分组 健康、雄性SD大鼠，体重250．300克(中国医科大学实验动物中心)。将动物 随机分成红霉素组(红霉素预适应12小时，假手术，24小时之后取材)、缺血组(手 术，缺血2小时，再灌注24小时后取材)、红霉素缺血组(红霉素预适应12小时， 手术，缺血2小时，再灌注24小时后取材)、正常对照组(假手术)，每组5只动 物。 二、大鼠缺血模型的建立 采用Longa法大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型，选用23．5mm鱼线，将阻塞端 内动脉)，从ECA(颈外动脉)插线，栓塞右侧大脑中动脉。线栓深度距CCA(颈 总动脉)分叉约18±lmm，J下常组除不插线外其他步骤相同。线栓保留2h后，小 心拔除到颈总动脉分叉处恢复血流。 三、神经功能评分 观察模型大鼠清醒后的行为学改变，按Longa五级四分法评定动物神经功能， 即：0分：不能自发的行走；1分：自由走动状态下向病变对侧旋转；2分：抓住鼠 尾，大鼠向病变对侧旋转；3分：对于施向病变对侧的侧压力抵抗力下降的；4分： 不能伸直病变对侧的前爪，甚至全身向对侧屈曲；5分：无神经功能的缺损。本实 验将第0、1、2、3、4分大鼠确定为成功模型。 四、TTC染色 大鼠处死后，取出脑组织放入．20℃速冻20分钟，以冠状位，每隔2mm切片 使脑片均匀接触到染色液，4％多聚甲醛固定保存(保存时间小于一周)。 五、脑组织梗死体积测定 应用图像分析软件计算脑梗死面积和各层组织，由公式V-∑(A+B)C／2，算 出梗死体积，A和B分别表示切片的上下梗死面积，C为切片的厚度，用此方法计 算出同层脑片体积，计算出梗死灶体积占全脑体积的百分比。 六、免疫组化 Cyt 酶，TTBS液冲洗，滴加