Klotho基因及大鼠心力衰竭心肌重构的相关性的分析研究.pdfVIP

目 录 Klotho基因与大鼠心力衰竭心肌重构的相关性研究………………………1 中文摘要………………………………………………………………1 AB STRACT……………………………………………………………4 英汉缩略词对照表……………………………………………………………7 前言……………………………………………………………………．8一日U舌……………………………………………………………………． 正文……………………………………………………………………9 1材料与方法………………………………………………………一．．9 1．1实验材料……………………………………………………………9 1．2主要实验试剂……………………………………………………………9 1．3主要实验仪器……………………………………………………………10 1．4实验方法……………………………………………………………．11 2结果…………………………………………………………………．28 2．1模型建立…………………………………………………………………．28 2．2大鼠心脏组织切片病理学HE染色……………………………………．28 2．3大鼠心脏组织绿色荧光分布情况……………………………………．30 l 2．4重组腺病毒转染HEK293细胞……………………………………．3 2．5重组腺病毒载体的构建………………………………………………．32 2．6各组大鼠心肺功能的检测结果……………………………………．36 2．7各组大鼠心脏体质量指数的检测结果………………………………．36 I 2．8大鼠心肌组织中Klotho和Colal和ColIIIalmRNA表达……37 2．9大鼠血清中BNP水平的检测结果……………………………………-38 3讨论…………………………………………………………………．．38 4结{仑…………………………………………………………………41 参考文献………………………………………………………………．．42 附录(综述)……………………………………………………………………46 攻读学位期间发表的学术论文目录…………………………………………．56 致谢……………………………………………………………………………．57 Klotho基因与大鼠心力衰竭心肌 重构的相关性研究 中文摘要 目的：探讨重组腺病毒介导的Klotho基因转染对大鼠心力衰竭(心衰) 进程以及心肌重构的影响，并探讨其机制。方法：SPF级SD大鼠，随机数 表法分为5组，即正常对照组(对照组，未给予任何干预)，一tl,衰组(只做 心衰模型，不给予其他干预)，生理盐水组(在心衰模型的基础上尾静脉注 射生理盐水，O．5ml／只)，腺病毒载体介导的增强荧光蛋白组(AD．EGFP组， 在-tl,衰模型的基础上用腺病毒载体介导增强荧光蛋白，2×1010ml／ pfu，0．5 ml／只)，每组6只。异丙 础上用腺病毒载体介导目的基因，2x1010pfu，0．5 肾上腺素连续腹腔注射法建立大鼠心衰模型。构建重组腺病毒载体 大鼠模型。建模第6周，采用超声心动图测定各组大鼠的左心室射血分数 (LVEF)；多道生理记录仪测定各组大鼠血液动力学变化；检测各组大鼠 心肌组织病理学改变；冰冻切片后镜下观察各组大鼠心肌组织荧光蛋白表 达水平；实时荧光定量聚合酶链反应评估各组大鼠心肌组织中Klotho基因 的表达水平，以及心肌纤维化相关因子I型胶原和III型胶原的表达水平； ELISA法检测各组大鼠血浆中B型利钠肽(BNP)的表达水平。结果： 红染色可见心肌细胞断裂、心肌间质增生、心肌细胞肥大和结构改变。对 鼠心肌纤维化程度、重构程度以及心肌细胞肥大程度均较一tl,衰组、生理盐 肌组织中仍可见EGFP绿色荧光表达，而对照组、心衰组和生理盐水组则