阿托伐他汀调节PI3KAkteNOS途径对UUO小鼠管周微血管密度的影响和机制.pdfVIP

阿托伐他汀调节PI3K/Akt/eNOS 途径对UUO 小鼠 管周微血管密度的影响及机制 摘要 目的：探讨阿托伐他汀(atrovastatin, ATO)调节磷脂酰肌醇-3 激酶/蛋白激酶-B/ 内 皮型一氧化氮合酶(phosphatidylinositol -3 kinase/protein kinase-B/endothelial nitric oxide synthase, PI3K/Akt/eNOS) 途径对单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO) 肾间质纤维化(renal interstitium fibrosis, RIF)小鼠管周微血管 (peritubular capillary, PTC)密度的影响及机制。 方法：96 只SPF 级雌性昆明小白鼠随机分为3 组，每组32 只：①单侧输尿管结 扎组(UUO 组) ：行右侧输尿管结扎术；②假手术组(Sham 组) ：进入腹腔后游离 右侧输尿管但不结扎；③单侧输尿管结扎+阿托伐他汀干预组(ATO 组) ：结扎右 侧输尿管后，予阿托伐他汀5mg.kg-1.d-1 灌胃直至处死。分别于实验第7、14、21 、 28 天每组随机抽取 8 只小鼠，颈椎脱臼处死，留取血液和肾脏标本：①检测血 + + 尿素氮、肌酐水平。②流式细胞检测外周血单个核细胞中CD133 /VEGFR2 双阳 性细胞比例。③HE 、Masson 染色后光镜下观察肾组织形态改变，并进行肾间质 纤维化评分。④免疫组化检测肾间质Akt 、p-Akt 和eNOS 的表达。⑤免疫组化 + 检测肾间质CD34 细胞数目以评估PTC 密度。 结果：①血尿素氮、肌酐水平：整个实验过程中三组小鼠血尿素氮、肌酐未见 明显变化，各组之间比较差异均无统计学意义(P0.05) 。②外周血单个核细胞中 CD133+/VEGFR2+ 双阳性细胞比例：造模前随机抽取 8 只小鼠检测外周血 + + CD133 /VEGFR2 双阳性细胞比例作为正常对照组。实验后三组小鼠外周血单个 + + 核细胞中CD133 /VEGFR2 双阳性细胞比例均于第1 周末升高达峰值，较正常对 照组明显升高 (P0.05) ，第2 周后下降；Sham 组第2 、3、4 周较正常对照组无 明显变化(P0.05) ，UUO 组第2 周末将至正常水平以下，第3、4 周较正常对照 组明显降低(P0.05) ，ATO 组第2 、3、4 周较正常对照组明显升高(P0.05) 。③ 肾间质纤维化评分：Sham 组肾间质纤维化评分在各时间点无明显变化，UUO 组 和 ATO 组肾间质纤维化评分均随着造模时间延长逐渐加剧，整个实验过程中 ATO 组较同期UUO 组明显降低，但仍较同期Sham 组升高，差异有统计学意义 (P0.05) 。④Akt 和p-Akt 的表达：Sham 组肾间质Akt 、p-Akt 的表达未见明显变 4 化，UUO 组第 1 周肾间质 Akt 、p-Akt 较 Sham 明显升高，差异有统计学意义 (P0.05) ，第2 、3、4 周表达逐渐下降，第3、4 周较Sham 组显著降低(P0.05) ； ATO 组肾间质Akt 、p-Akt 的表达在第1 周末达高峰，以后随造模时间延长逐渐 降低，各时间点均高于同期Sham 组和UUO 组(P0.05) 。⑤eNOS 的表达：Sham 组肾间质eNOS 的表达未见明显变化，UUO 组和ATO 组肾间质eNOS 的表达均 随着造模时间延长逐渐降低，第2 、3、4 周均明显低于Sham 组(P0.05) ，第2 、 3、4 周各时间点ATO 组较UUO 组明显升高(P0.05) 。⑥PTC 密度计数：Sham 组肾间质PTC 密度未见明显变化，UUO 组和ATO 组肾间质PTC 密度均随着造 模时间延长逐渐降低，第 2 、3、4 周均明显低于 Sham 组(P0.05