膜分离技术在食品微生物检测方面的应用-于冰.pdf

滤膜分离技术在食品微生物检测方面的应用 于冰 sartorius LPS 微滤膜的历史及介绍 微滤膜分离技术始于19世纪中叶，是以静压差为推动力，利用筛网状过滤介 质的 “筛分”作用进行分离的过程。 膜过滤的主要作用是从气相或液相物质中去除 （截留）胶体、细菌和固体物 质，以达到净化、分离和浓缩等目的。 Richard Zsigmondy理查德.西格诺里 化学家/物理学家 1925年获诺贝尔奖； 1918年发明膜过滤器 ； 1922年发明超滤过滤器 (cold-ultra-filter)，这 是赛多利斯分离技术的基础 。 微滤膜的主要技术特点： 膜孔径均匀、过滤精度高、过滤速度快、吸附量少、无介质脱落 主要应用领域： 食品饮料、医药卫生、环境监测等领域 微滤膜的分离机理： 筛网分离，膜的物理结构对分离起决定性作用；吸附、膜表面的电化学 性质对分离也有影响 为什么要检测微生物？ 病原微生物对人体健康形成的危害历史悠久， 受病原微生物污染的水体中含有大量的致病菌、 病毒等，可引起伤寒、痢疾、霍乱和腹泻等肠 道疾病。 食品被细菌污染后不但会引起食物变质，同时 对人体健康也会造成危害 细菌总数检测的卫生学意义 (1) 判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 (2) 及时反映食品加工过程是否符合卫生要求，为被检食品卫生学评价 提供依据。 (3) 通常认为，食品中细菌数量越多，则可考虑致病菌污染的可能性越 大，菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。 在实际工作中经常以检查食品、水体的细菌总数，特别是检查作为粪便 污染的指示菌来间接判断食品及水体污染状况和环境卫生学质量。粪便 污染指示菌一般是指如有该指示细菌存在于水体中，即表示水体曾有过 粪便污染，也就有可能存在肠道病原微生物，那么该水质在卫生学上是 不安全的。 检测方法——多管发酵法 根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢， 呈杆状等有关特性，通过初发酵试验 （推测试验）、再进行平板分离 （证实试 验）、复负发酵试验鉴定 （完成试验）三个步骤进行检验求得水样中的总大肠 菌群数。试验结果以最可能数 （most probable number），简称MPN表示。 多管发酵法由于只需要根据水样的取样量来决定将样品培养于何种培养液中 （单倍或是三倍乳糖）进行培养，因此理论上可适用于各种水样，但由于受发 酵管容积的限制，其更适合检测水源水、地表水和污染源废水 （取样量不大）， 而且如果接种的水样量不是MPN 表中的3 种接种量时，还需用公式进行换算。 多管发酵法的培养时间至少需要2 天以上，且对接种量、每一接种量的发酵管 数都有严格要求。 检测方法 ——膜过滤法 将适当孔径的滤膜放入滤器，过滤样品，由于滤膜的作用而将微生物保留 在膜的表面上。样品中微生物生长抑制剂可在过滤后用无菌水冲洗滤器而 除去。然后，将滤膜放在培养基上培养，营养物和代谢物通过滤膜的微孔 进行交换，在滤膜表面上培养出的菌落可以计数，并和样品量相关。 膜过滤法在微生物的检测、计数及鉴定方面具有很多优势：  可以检测大体积样品  不需要太大的操作空间  是对微量感染的早期检测  抑制剂可被冲洗掉  过滤膜可以经过处理后存档  对于浑浊的饮料可以做预过滤处理 恰当选择网格膜颜色可简化对微生物菌落的检测 硝酸纤维素膜有很多颜色，不是只有白色或黑色。膜和网格颜色的选择应当受 微生物培养基成分的影响，例如培养基是否含有染料，目的是使菌落和膜形成 鲜明的对比，便于观察与计数。 膜颜色的选择不受微生物培养基形式的影响。过滤膜上的菌落计数既可以在传 统的琼脂板上做，也可以在有液体培养基的纤维素吸附垫上，或者是在脱水的 NPS上。 NPS是什么？ • 即用型培养基 （滤膜＋培养基＋培养皿） • 基于预先装填培养基的无生物活性吸收垫 • 已灭菌 • 无菌培养皿包装 • 预先选配最合适的过滤膜 • 提供批次QC认证 11 März 2009 Page 7 NPS