人类子宫内膜癌及mtDNA基因单倍群相关性探究.docVIP

人类子宫内膜癌及mtDNA基因单倍群相关性探究[摘要] 目的 探讨mtDNA单倍群与子宫内膜癌的相关性。 方法 选取2010年1月～2012年10月间于我院就诊的子宫内膜癌患者32例作为观察组，另外选取同期在我院进行健康体检与其匹配的本地女性居民32名作为对照组。采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法确定mtDNA单倍群，通过聚合酶链式反应-高温连接酶检测反应（PCR- LDR）的方法检测基因型与子宫内膜癌的相关性。 结果 观察组中有16例39个基因位点发生突变，其中mtDNA基因多态性改变有5例，对照组则有4例13个基因位点发生突变，mtDNA基因多态性改变有1例。两组比较差异有统计学意义（P 0.05）。 3讨论 随着人类进化迁移，不同地域的个体为了适应环境，其自身的线粒体基因发生突变以改变氧化呼吸链的效能来适应环境，逐渐形成了不同地域所特有的mtDNA单倍群类型。个体线粒体基因序列上的变异从一方面很好的适应了环境赢得了生存，另一方面却可能导致个体成为某些疾病的易感人群，使某种疾病的特定人群中高发[5]。尽管越来越多的证据支持mtDNA异常具有致病性，并在肿瘤发生机制中起重要作用，mtDNA突变和mtMSI作为肿瘤非侵入性临床诊断的分子标记物也得到了广泛的支持。但是纵观目前对子宫内膜癌的线粒体基因的研究，仍然存在如下问题[6-8]：①研究重点放在体细胞突变上并寻找一系列体细胞mtDNA突变，但由于这些突变是后天形成，如果想在繁多的突变位点中找到一个肿瘤细胞共有的突变来协助临床诊断是相当困难的。②无论在子宫内膜癌还是其他妇科肿瘤中，肿瘤患者mtDNA基因多态的研究非常少见。mtDNA具有母系遗传、缺乏重组、进化率高的特点，因此是一个非常好的分子生物学标志物，将其引入子宫内膜癌病因学的研究中，可以为明确癌症高发人群提供线索。③迄今为止mtDNA单倍群类型与子宫内膜癌之间的关系并没有得到充分阐明。虽然Wu等在我国云南省开展过类似研究，但是其只纳入49例病例和31例对照，样本量偏小，人群代表性较差。 mtDNA结构简单，缺乏组蛋白和非组蛋白保护，环境特殊，处在活性氧及其他自由基包围之中；mtDNA分子量小，无内含子，在整个细胞周期中处于不断合成的状态，而负责mtDNA复制的DNA聚合酶γ校对能力差，而且mtDNA由D-loop区单链启动复制，容易在tRNA基因部位出现发夹样结构，mtDNA还缺乏有效的损伤修复系统[9]。因此，mtDNA易受各类诱变因素作用而发生损伤和异常，其突变率比核DNA高10～20倍。 根据近10年来的文献报道，在人类多种实体瘤，包括头颈、乳腺、肺、胃、结肠、膀胱、前列腺和卵巢等处的恶性肿瘤细胞中均发现mtDNA突变或表达异常[10]。特别是mtDNA中的D-loop区紧靠电子传递链，而且D-loop区是mtDNA复制转录的调控区，由此可推测D-loop区可能是mtDNA突变的热点区域，许多报道也支持此假设。Trappen等[11]发现在32例原发胃癌病例中有17例（53%）存在mtDNA 4977 bp大片段的缺失，突变大多发生于D-loop区和ND1、ND2区。Pejovic等[12]对59例肝癌肿瘤组织及相应的癌旁组织中mtDNA进行检测，结果发现在D-loop区的100～600 bp的碱基之间突变频率最高，所有突变均为260 bp处G→A，489 bp处T→C的单碱基替换，以及311→312 bp之间的C插入。另外，Máximo等[13]检测了19例肝细胞癌患者的肿瘤组织，发现有68%（13/19）存在mtDNA D-loop区的突变。Mambo等[14]对50例肝细胞癌病人进行检测，结果在肿瘤组织中发现的100处基因变异中有34%（17/50）发现D-loop区的突变，并且在随后的匹配血浆检测中33%（5/15）在其相应的血浆中检测到一致的mtDNA突变。 　　综上所述，mtDNA可能在子宫内膜癌的发生发展中起重要作用，其D-loop区存在的基因多态位点与子宫内膜癌之间具有显著关联，不同mtDNA单倍群类型的个体对子宫内膜癌的罹患风险有所不同。本研究以舟山地区的子宫内膜癌患者和健康居民为研究对象，采集静脉血样品抽提纯化线粒体DNA，采用PCR技术对mtDNA中D-loop区片段进行扩增，并对扩增产物进行测序分析，明确多态位点的基因型并获得mtDNA单倍群的信息，从而分析mtDNA中D-loop区基因多态和单倍群类型与子宫内膜癌之间的相关性，为确定子宫内膜癌高危人群开辟新的途径，为子宫内膜癌的预防和诊断提供新的科学依据。 [参考文献] [1] Schapira AH. Mitochondrial dysfunction in neurod