环孢素A减轻β淀粉样蛋白25-35诱导PC12细胞损伤的实验探究.pdfVIP

中文摘要 环孢素A减轻13淀粉样蛋白25-35诱导PCI2细胞损伤的实验研 究 摘 要 目的：阿尔茨海默病(Alzheimersdisease，AD)是老龄人群中最常见 的中枢神经系统退行性疾病，严重损害患者的认知功能。随着社会人口老 龄化的不断加剧，AD的防治已经成为一个严峻的社会问题。目前，对于 AD尚没有理想的治疗方法，寻求有效的治疗药物成为研究者的努力方向 集和沉积是导致患者脑内神经元变性、丢失乃至形成痴呆的关键因素。因 此，很多研究致力于开发干扰Ap合成和沉积的药物类型。目前，通过提 溶酶体对受损细胞器和老化、毒性蛋白进行吞噬降解的一种主动清除方 式，对维持细胞内环境稳定和行使正常生理功能起着积极的作用。+有研究 发现，在AD患者及动物模型中，存在自噬水平的降低，可能与AD的发 system，ALP) 病有关。适度提高白噬溶酶体途径(autophagic-lysosomal 的活性，可以加速有聚集倾向的蛋白的降解，有可能对A13等蛋白沉积引 起的神经退行性疾病如AD起到治疗作用。很多研究表明环孢素 A(CyclosporinA，CsA)具有神经保护作用，而且近期有文献报道CsA能够 在大鼠脑细胞中诱导自噬，但是尚未见报道CsA对AD有无保护作用， 对自噬水平有何影响。我们利用A13 的体外细胞模型，观察不同浓度CsA对受损PCI2细胞的活力及代谢状态、 存活率以及形态学的影响，并观察CsA对受损PCI2细胞的保护作用是否 与自噬通路相关。 方法： lXM、10IXM、20laM、30IX 1325．35 箱中培养。 (2)分别给予0 M的A B laM)的AB25．35 25．35对PCI2细胞的损伤程度，并选取适合浓度(20 M、O．5M、1．0 u u 干预PCI2细胞，建立AD的体外细胞模型。使用O．1 uM、1．5uM、2．0IX 中文摘要 13 予20uM的A25．35继续培养24h。MTT法检测细胞活力及代谢状态， u 从中选取CsA的有效保护剂量(O．5M)用于后续实验。将细胞分为正常对 uM 照组、模型组、O．5 CsA预处理组，分别进行如下实验：①光镜下观 iodide，PI)双染法检测各组细胞的存活率。③免疫荧光染色法检测细胞 LC3的表达，观察自噬活性的变化。 B 结果： (1)AD模型的建立：给予PCI2细胞不同剂量A25．35处 B 理后进行MTT检测，结果显示A25．35对PCI2细胞具有损伤作用，且 uMA uMA 呈剂量依赖性。其中，20 13和30 13组与对照组相比，光密度 uMA 值具有统计学差异(P=-0．000；P=O．ooo)，本实验选择2013对PCI2 细胞处理作为AD的体外细胞模型。(2)CsA有效剂量的选择：给予各 组PCI2细胞相应处理后，使用酶标仪检测570nm处的光密度值。模型组 细胞光密度值较空白组明显降低(P0．001)，与前实验结果相符；O．5 uM CsA预处理的PCI2细胞光密度值与AB2