神经元限制性沉默因子参与大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞体外分化过程的实验探究.pdfVIP

神经元限制性沉默因子参与大鼠骨髓间充质干细胞向神经 样细胞体外分化过程的实验研究 摘要 【目的】： l、研究成纤维生长因子bFGF，碱性生长因子EGF联合全反式维甲酸诱导大鼠 骨髓问充质干细胞向神经样细胞体外分化过程中的神经特异性标志的表达变 化。 生长因子bFGF，碱性生长因子EGF联合全反式维甲酸诱导大鼠骨髓间充质 干细胞(MSCs)向神经元分化过程中表达的变化。 及MSCs向神经元分化的进程。 【方法】 1．通过贴壁法分离培养sD大鼠骨髓间充质干细胞，并经形态学、细胞表面标记 和分化潜能鉴定。 bFGF预诱导24小时后，采用成纤维 2．取P5代细胞种植于6孔板。用lOn咖l 生长因子bFGF，碱性生长因子EGF联合全反式维甲酸的方案进行诱导，分别 于干预Iji『与干预后l，3，5，7，9天，采用免疫细胞荧光化学检测神经元特异 3．采用实时定量PCR染料法，对照组不加诱导剂，分别于干预前与干预后1，3， 5，7，9天检测神经元限制性沉默因子(NS嗍ST)及其相关基因p．玳P、 SCGl0、BDNF的mRNA的相对表达量。 【结果】 1．通过贴壁法分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞，5代后细胞呈均一梭形漩涡 脂肪细胞，神经细胞分化的多向潜能。 2．应用成纤维生长因子bFGF，碱性生长因子EGF联合全反式维甲酸的诱导方 案可以将MSCs诱导分化成神经元样细胞，诱导后的细胞神经元标记物神经 趁势『F相关，第7天表达最高，诱导第9天表达下降；胶质细胞标志GFAP 于诱导第9天表达明显增加。 I 【结论】 1．贴壁法可以大量培养骨髓间充质干细胞。 2．采用细胞因子bFGF、EGF联合RA的诱导方案可诱导大鼠骨髓间充质干细胞 向神经样细胞分化。短时间内延长诱导时间可增加神经元特异性标志NSE及 B．劬ulinIII的表达，进一步延长诱导时间可诱导向胶质细胞分化。 很可能是MSCs向神经方向分化的关键基因。 【关键词】骨髓间充质干细胞；分化；神经元限制性沉默因子；神经样细胞 2 The in ofneuronalrestrictedf．actor stlIdyprocession silencing inthediffbrentiationofratbonemarrow participates mesenchymal stemcelIsintoneural．1ikecell Abstract 【objective】 in 1．T0 the ofneural markers1 chaJlges bFGF， aIlalyzeexpression special 0ng／ml l EGF孤d RAinductionofthem绷∞w stemcells Ong／ml O．5ug／ml mesenchymal neural-likecellsinvitr0． (MSCs)to the oftheneuronalrestricted 2．T0锄alyzechallge sil锄cing 1 EGF wellastheNRSF in bFGF，l