缺血后适应的干预时间和循环次数对家兔短期缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响.pdfVIP

摘 要 目的： 心肌的缺血再灌注后,会出现心肌的缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury; IRI), 直接影响到患者的预后。现在已经证实缺血后适应(Ischemic postconditioning,IPost)可以有效 的减轻 IRI。近期的研究显示缺血后适应是否能发挥心肌保护作用,减少心肌细胞凋亡，还有两个最 关键的影响因素: 短暂缺血/复灌的持续时间和循环次数。本研究通过 TUNEL 法观察心肌细胞凋亡情 况及免疫组化法观查诱导凋亡基因 Bax 及抗凋亡基因 Bcl-2 的变化情况。探讨家兔缺血后适应不同 的干预时间和循环次数对心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡的影响。 方法： 66 只新西兰大白兔随机分为实验一大组和二大组。其中实验一大组 36 只家兔随机分为 6 组 (n=6)；假手术对照组(S1组)、缺血/再灌注对照组(IR1 组)、缺血后适应组(Post1-4组)。除 S1组 外，其余 5 组均接受左冠脉前降支 15min 阻断和 30min 再灌注，Post1-4 组在 15min 缺血后分别接 受连续 3 次缺血/再灌注10s、15s、30s 及45s 的后适应。实验二大组 30 只家兔随机分为 5 组(n=6)； 假手术对照组(S2 组)、缺血/再灌注对照组(IR2 组)、缺血后适应组(Post5-7 组)。除 S2 组外，其 余 5 组均接受左冠脉前降支 15min阻断和 30min 再灌注，Post5-7 组在15min 缺血后分别接受缺血/ 再灌注各 30s 的1 次、2次及 3 次循环的后适应干预。取各组缺血再灌注区心肌组织行 HE 染色光镜 观察各组组织学特点、TUNEL 分析检测兔短期缺血再灌注心肌组织的细胞凋亡情况、免疫组织化学 方法检测 Bcl-2、Bax 蛋白的表达。 结果：实验一大组：TUNEL 检测：⑴除 S1 组外各组均出现 TUNEL 阳性细胞。⑵凋亡指数 Post1-4组 显著低于 IR1 组（P0.01）。⑶Post1-4 组间两两比较，Post3 组与 Post1 组、Post2、Post4 组有统 计学意义，而 Post1、Post2、Post4组两两比较无统计学差异（P0.01）。Bcl-2,Bax蛋白免疫组织 化学结果：⑴ 所有组均有 Bcl-2 及 Bax 蛋白表达。⑵ S1 组、IR1 组和 Post1-4 组 Bcl-2 表达水平 之间均有显著差异 （P0.05)。⑶各组间两两比较，Post1-4 各组 Bcl-2 蛋白表达高于 IR 组(P0.05)， Post3 组Bcl-2 蛋白表达高于 Post1组、Post4 组 (P0.05)，另外缺血后适应 Post1、Post2、Post4 组两两比较无统计学差异。⑷S1 组、IR1 组和Post1-4组 Bax表达水平之间均有显著差异 （P0.05)。 ⑸组间两两比较Post1-4各组Bax蛋白表达低于IR1组 (P0.05)， Post3组Bax蛋白表达低于Post1 组、Post2、Post4 组 (P0.05)，但与S1 组比较无统计学意义，另外缺血后适应 Post1、Post2、Post4 组两两比较无统计学差异。 实验二大组：TUNEL 检测：⑴除 S2 组外各组均出现 TUNEL 阳性细胞。⑵凋亡指数Post5-7 组 显著低于 IR2 组（P0.01 ）。⑶Post5-7 组间两两比较，Post7 组与 Post5 组、Post6 组有统计学意义， Post5 组与 Post6 组比较无统计学差异（P0.01 ）。Bcl-2,Bax 蛋白免疫组织化学结果显示：⑴ 所有组 均有 Bcl-2 及 Bax 蛋白表达。⑵S2 组、IR2 组和 Post5-7 组 Bcl-2 表达水平之间均有显著差异（P0.05) 。 ⑶组间两两比较，Post5-7 各组 Bcl-2 蛋白表达高于 IR2 组 (P0.05) ， Post7 组 Bcl-2 蛋白表达高于 Post5 组、Post6 组 (P0.05) ，但Post5 与 Post6 组两两比较无统计学差异。⑷S2 组、IR2 组和 Post5-7 组 Bax 表达水平之间均有显著差异（ P0.05) 。⑸组间两两比较，S2 组与 Post6 、Post7 两组 Bax 蛋 白表达无统计学差异，Post7 组 Bax 蛋白表达低于 Post5 组(P0.05) 有统计学意义。 结论：⑴缺血后适应的不同干预时间和不同的循环次数均可减少缺血再灌注心肌细胞的凋亡指