羟基红花黄色素A对体外培养子宫内膜异位症在位内膜细胞增殖和细胞因子表达的影响.pdfVIP

—p，—一———‘、 目 录 中文摘要………………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………………·5 研究论文羟基红花黄色素A对体外培养子宫内膜异位症在位子宫内 膜细胞增殖及细胞因子表达的影响 l1 前言……………………………………………………………………………………··l刚舌……………………………………………………………………………………”l 材料与方法…………………………………………………………”12 结果……………………………………………………………………………………··17 附图………………………………………………………………………20 附表……………………………………………………………………………………·25 讨论……………………………………………………………………………………··28 参考文献……………………………………………………………·31 综述血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子与子宫内膜异 位症血管形成与抗血管形成的研究展…………”…………·34 致谢……………………………………………………………………………………………·50 个人简历……………………………………………………………………·51 中文摘要 羟基红花黄色素A对体外培养子宫内膜异位症在位内膜细胞增 殖及细胞因子表达的影响 摘 要 目的：以不同浓度羟基红花黄色素A(HSYA)干预体外培养子宫内 (MTT)检测HSYA对在位子宫内膜细胞的生长增殖的影响，酶联免疫 分泌的影响。从而探讨HSYA治疗子宫内膜异位症的可行性。 方法： 1研究对象 1．2对照组：选择同期在我院因、纵隔子宫、畸胎瘤、单纯囊肿经腹腔镜 检查无盆腔子宫内膜异位症(术后病理证实正常子宫内膜增殖期)者，共 14例(34．92士8．11岁)。 两组患者月经周期正常，近6个月无服用激素类药物及免疫抑制类药 物史及IUD置入史。排除：子宫内膜息肉、急慢性盆腔炎、乳腺癌、子 宫内膜癌等其它妇科恶性肿瘤；内分泌、免疫及代谢性疾病；高血压、心 脏病、肾病等内科疾病等。采取标本均得到患者的同意，并签署了知情同 意书。 2标本采集 刮取子宫内膜，立即置于冰浴的含青霉素和链霉素的l：1DMEM／F12 培养基中，2,b时内送实验室进行培养。 3实验方法 3．1细胞培养 子宫内膜组织经漂洗、分离、消化、过滤。台盼兰染色，鉴定细胞活 换液，弃去未贴壁细胞及红细胞，继续培养，每隔48h换液一次，倒置显 微镜下观察细胞形态变化及生长状况。 中文摘要 细胞长满80％瓶壁时，胰蛋白酶消化后，传代培养。细胞波形蛋白抗 体及角蛋白抗体进行免疫化学细胞鉴定。 3．2细胞生长测定 3．2．1正常生长曲线 取第2．3代细胞接种于96孔培养板，并设凋零孔。培养24、48、72、 检测仪测定细胞吸光度值(OD值)，绘制细胞生长曲线。 3．2．2药物干预后细胞生长曲线 取第2．3代细胞接种于96孔培养板，24h贴壁后加入不同浓度的 后加MTT、DMSO，测定OD值，绘制细胞生长曲线。 3．3ELISA法测定细胞因子 的含量。 结果： l细胞生长情况 EMs在位内膜细胞培养成功率为93．3％，正常子宫内膜细胞培养成功 率为92．9％，细胞活力均在90％以上。 2细胞鉴定 ①基质细胞Vimentin染色阳性，细胞胞浆呈棕黄色。②腺上皮细胞 抗，Vimentin及Cytokeratin染色均阴性口 倒置显微镜下观察，子宫内膜细胞接种O．5h后即开始贴壁，24h后基本 贴壁完全并开始生长。约2．4天细胞生长加快，以后生长减慢开始进入平台 期。细胞紧密连接，排列较规则。 3药物对离体细胞生长的影响 3．1HSYA对离体细胞生长的抑制作用 药物作用24h后，细胞生