褐藻多糖硫酸酯对人肾间质成纤维细胞地影响.pdfVIP

褐藻多糖硫酸酯对人肾闻质成纤维细胞的影响 硕士研究生： 商滨 指导教师：鞠建伟教授 专业名称： 中西医结合·临床 摘 要 目的：研究褐藻多糖硫酸酯(FPS)对体外培养的人肾间质成纤维 细胞(HRIF)增殖的影响，对其分泌纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋 响，以期探讨FPS抗肾间质纤维化的作用机理，为药物的进一步开发 提供分子细胞学理论依据。 方法： 1．HRIF的原代培养与鉴定：取人肾肾乳头组织，切碎后经 胰蛋白酶消化，用含15％胎牛血清的DMEM—F】2培养液在5％C02、 37。C孵育箱中培养。通过细胞形态、免疫荧光化学检测波形蛋白、Q． 肌动蛋白、细胞角蛋白和结蛋白等作细胞鉴定。 2．台盼兰拒染法进行细胞毒试验检测药物安全性：以不同浓度的 FPS(25I_tg／ml、50 不同时间(24小时、48小时)，用不加药物的HRIF作对照。结束培 养后，洗脱细胞，台盼兰染色，计算各组活细胞比率。 3．MTT法检测细胞增殖：以不同浓度的FPS(2599／ml、 小时、48小时)，用不加药物的HRIF作对照。结束培养后，采用MTT 法检测各组HRIF增殖情况。 4．ELISA法分别检测FN、LN、TGF．B1的水平：以不同浓 束培养后各组取细胞培养上清液，用ELISA法分别检测FN、LN、 TGF一81的分泌水平。 5．流式细胞仪检测HRIF凋亡情况：以不同浓度的FPS(25 24小时， 用不加药物的HRIF作对照。结束培养后，流式细胞仪检测细胞凋亡 率。 结果： 1．培养细胞为均匀生长的长梭形细胞，含单个核，胞核多为单个椭 圆形，核大，胞质透明，细胞呈辐射状生长梭形，表达波形蛋白和Q一 肌动蛋白，而不表达细胞角蛋白和结蛋白。 2．FPS孵育HRIF24、48h，活细胞比率各组均在94％以上。 的增殖(P0．01)。 4．与空白对照组相比，FPS可显著减少HRIF对FN、LN的分泌 (P0．01)，而对TGF—pl的分泌无统计学差异(P0．05)。 5．FPS作用HRIF24小时，经流式细胞仪检测各组均未见凋亡峰出 现，证实FPS对体外培养地HRIF细胞无诱导凋亡作用。 6．本实验研究范围内，200 FPS作用HRIF24h为最佳作用浓 J-tg／ml 度时间。 结论：本实验成功培养了人肾间质成纤维细胞。证实FPS可明显 抑制体外培养的HRIF增殖，而且可以减少FN、LN两种细胞外基质 的分泌，推测FPS可能减少。肾问质中细胞外基质的堆积，减轻肾间质 纤维化，这可能是FPS抗肾闻质纤维化、防治慢性肾衰竭的作用机制 之一。其中在本实验研究范围内，20099／ml褐藻多糖硫酸酯作用人肾 间质成纤维细胞24h为最佳作用浓度时间。 关键词：褐藻多糖硫酸酯肾成纤维细胞纤维连接蛋白 层粘连蛋白转化生长因子D1凋亡 褐藻多糖硫酸酯对人肾问质成纤维细胞的影响 硕士研究生：商滨 指导教师： 鞠建伟 教授 专业名稚： 申西医结合临床 刖 吾 慢性肾衰竭是多种肾脏疾病损害和进行性恶化的最终结果。其主 要、共同病理特征均为肾间质纤维化，表现为肾间质成纤维细胞的大 I、III、Ⅳ、 量增殖和细胞外基质(Extracetluarmatrix，简称ECM)女I V型胶原、纤维连接蛋白、层粘连蛋白等的过度积聚。其中小管间质 中的间质细胞，尤其是成纤维细胞，在肾间质纤维化中起关键作用。 据北美、西欧和澳大利亚统计，每年每百万人群中有100～150人 发生慢性肾衰。在我国，每年约新增慢性肾功能衰竭患者20万人。目 前终末期肾病的替代疗法主要有血液透析、腹膜透析、肾脏移植等， 使患者生活质量有所提高，但死亡率并未减少