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端粒末端G-四联体结构的形成以及 以G-四联体结构为靶点的端粒酶抑制剂研究进展 王婷婷 摘要：端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构，由简单的DNA片段重复而成，这些片段多富含G，因此这种DNA被称为富-G DNA。G-四联体就是单链部分的富-G DNA在特定的离子强度和PH值条件下形成的结构。肿瘤细胞中这种结构的形成可抑制端粒酶的活性，使端粒长度稳定机制遭到破坏。因此G-四联体成为目前抑癌手段的新热点。 关键词：G-四联体 端粒 端粒酶抑制剂 富-G DNA 1.端粒和端粒酶 端粒作为一种特殊的染色体末端的结构，存在于真核生物细胞中，由端粒DNA和端粒蛋白质组成。其中，端粒DNA的G碱基含量很多，经常由简单的富G-DNA片段高度重复而成。端粒具有高度的保守性和种属特异性。 1.1端粒存在的意义 在DNA复制过程中，由于其只能从5’端向3’端顺序复制，新生成的DNA中只有一条单链是顺序复制下来的，另一条单链则会以RNA引物加上冈崎片段的形式复制。 其中一条新单链5’端会被RNA引物先行占据。（图1） 图1 DNA复制 当复制完成后，RNA引物会自行脱下，接着由DNA连接酶识别每个冈崎片段的末尾，对其与下一个冈崎片段的开头进行连接（从上图中看是从右向左进行连接）。这时就出现了一个问题，那条新单链的5’端（最右端）没有上个冈崎片段的末尾，DNA连接酶不能补全它由于RNA引物的脱去而缺失的部分。这个问题被称为末端隐缩。 有端粒存在的情况下，在染色体进行复制时，丢失的部分只是一段高度重复的DNA（在上图中也就是存在于原DNA的3’端，并不含有翻译后有意义功能的序列）——即一部分端粒，用这种方法保证了染色体的完整复制，这是端粒的主要作用之一。当然，因为染色体是互补配对进行复制的，所以在DNA的5’端也有端粒的序列，以保证子代DNA的3’端在下次复制时不会丢失重要序列。由此可见，端粒是真核生物进化过程的产物，因为它的存在，复杂的染色体复制机制才可以周而复始地进行下去。 由于每次都是子代DNA的5’端不能复制原DNA的序列，所以相比较而言，子代DNA3’端比5’端的序列要长。由此类推，所有DNA的端粒部分，3’端都比5’端要长一些。这和下面介绍的G-四联体的形成息息相关。 除此之外，端粒位于染色体的末端，还可以有效避免染色体相互之间的融合，避免核酸酶将染色体降解。有一个很好的比喻——端粒就如同一条鞋带末端的胶圈，没有胶圈，鞋带末端就会开始散开，鞋带也就失去了使用的价值。在染色体中，失去端粒将意味着基因的不稳定，基因突变和基因丢失的几率增加，也会因此触发细胞的凋亡机制。比如P53抑癌基因，它的触发就源于细胞中端粒缩短到一定的临界长度，这个细胞再生长增殖下去已经对生物体的基因稳定有威胁，于是会由P53来诱导此细胞凋亡。由此，细胞中如果端粒维持在一定的长度，细胞便不会凋亡，肿瘤细胞便是如此。究竟是什么导致了肿瘤细胞中的端粒不会缩短呢？答案是端粒酶。 1.2 端粒酶的作用 端粒酶是一种逆转录酶，由RNA，蛋白质以及催化亚基组成。它能以自己的RNA为模板合成端粒DNA序列，维持甚至增长端粒的长度，这一切的前提是在端粒酶有活性的情况下。在胚胎期，端粒酶的活性很高，很多组织中都能测出它的存在。但随着细胞的分化，端粒酶的活性很快下降，因为其基因表达受到抑制。在正常情况下，除了在干细胞，造血细胞等必须不断分裂的细胞中，仍能检测出端粒酶的活性外，其余的细胞中均没有有活性的端粒酶的存在。这说明，端粒酶的活性在正常细胞中受到很严密的调控。 而在恶性肿瘤细胞中，几乎都可以测到端粒酶的活性。这使得恶性肿瘤细胞的端粒总能被延长而保持一定的安全长度，染色体将永远完整的被复制，细胞因此不会走向凋亡，只会不断增殖扩散。 2 G-四联体 G-四联体是G-四联体螺旋的基本单位，也是四联体DNA的一种特例。 2.1 G-四联体的形成 以人的DNA为例，在端粒末端靠近3’一端是富含G重复序列的的，比如重复序列TTAGGG（同理，另一端5’端则富含C，即是AATCCC）。这种富含G的DNA被称为-G DNA。而上面提到，端粒末端3’端总比5’端要长一些，被称为“端粒尾”，所以端粒尾既是-G DNA又是单链DNA。 …… 图2 人端粒末端序列 1989年，Sundpuist和Klug发现在一定条件下