新型PKC同工酶在人近端肾小管上皮细胞表达谱和尿蛋白对其表达影响.pdf

新型PKC同工酶在人近端肾小管上皮细胞的表达谱及尿蛋白 对其表达的影响 中文摘要 【目的】 肾间质纤维化是几乎所有慢性肾脏疾病进展到终末期肾功能衰竭的共同通 路。肾小管一间质的损害与肾功能毁损密切相关。作为构成肾小管间质结构的主 要细胞之一，肾小管上皮细胞不仅是疾病进展中的受损者，而且是间质炎症、纤 维化的积极参与者，在小管间质病变进展过程中起重要作用。众所周知，包括尿 蛋白在内的多种致病因子对肾小管上皮细胞的损伤大多是通过细胞内信号传导 通路介导的，而蛋白激酶C(PKC)是细胞信号传导通路中极其重要的环节之一。 本研究从细胞信号传导通路入手，通过检测正常培养及受不同浓度尿蛋白刺激损 伤的HK-2细胞新型蛋白激酶C同工酶(nPKCs)的表达谱，筛选出受尿蛋白刺 激而损伤的HK．2细胞表达或上调表达的nPKCs，为进一步明确其在此损伤过程 中的作用，以及寻找一种可通过调节nPKCs表达和活化而延缓尿蛋白所致肾小 管上皮细胞损伤的新的治疗方法提供理论依据。 【方法】 1．应用硫酸铵沉淀法提取原发性肾病综合征(局灶节段性肾小球硬化型)患者 尿液中的总蛋白成分； 2．以人近端肾小管上皮细胞株(HK-2细胞)作为研究对象；分别以不同浓度的尿 蛋白(0 mg／ml，1mg／ml，2mg／ml，4mg／ml，8mg／m1)处理体外培养的HK-2细胞 24h和48h： 3．应用免疫细胞化学技术(ICC)检测正常对照及受不同浓度尿蛋白刺激后的 HK-2细胞PKC-6、PKC-T1、PKC·0、PKC吨及PKC—p表达情况； 4．应用SPSSl6．0统计软件进行结果统计分析。 【结果】 1．所提取尿蛋白的主要成分为白蛋白、转铁蛋白和IgG等，分别占72．1％、17．9 ％和9．5％，其它占0．5％； 2．PKC．0在正常对照组及尿蛋白刺激组HK-2细胞均表达，表达部位主要在胞 细胞PKC．0表达量较正常对照组增高(PO．01)，其余各组间差别无统计学意 培养组明显增高(P0．01)； 3．PKCd$在正常对照组及尿蛋白刺激组HK-2细胞均表达，表达部位主要在胞 组间差别无统计学意义(PO．05)。尿蛋白刺激48h后，2 mg／ml，4mg／ml，8mg／ml 尿蛋白刺激组PKC_6的表达量较正常对照组增高(PO．01)； 4．PKC．￡在正常组及尿蛋白刺激组HK-2细胞胞浆广泛表达。ICC半定量分析结 果显示，尿蛋白刺激24h和48h后，各尿蛋白刺激组与正常对照组PKC-e表达 量差异无统计学意义(PO．05)； 5．PKC-rl在正常对照组及尿蛋白刺激组HK-2细胞均呈低水平表达，表达部位 主要在胞浆。ICC半定量分析结果显示，尿蛋白刺激24h和48h后，各尿蛋白刺 激组与正常对照组PKC．rl表达量差异无统计学意义(P0．05)； 6．PKC．斗在正常对照组及尿蛋白刺激组HK-2细胞均有表达，表达部位主要在 胞浆。ICC半定量分析结果显示，尿蛋白刺激24h后，尿蛋白刺激组与正常培养 尿蛋白刺激组PKC．p表达量较正常对照组增高(PO．01)，而其余各浓度尿蛋 白刺激组组间差别无统计学意义(P0．05)。 【结论】 PKC同工酶6、rl、0、￡、肛在正常对照及受不同浓度尿蛋白刺激而损伤的 HK-2细胞均有表达，表达情况有所不同。尿蛋白可明显上调PKC--6，儿0的表达。 初步推测PKC．4i、PKC．“、PKC-0可能参与了尿蛋白所介导的肾小管上皮细胞 细胞损伤的具体机制，对寻找一种干预其表达和活化而延缓尿蛋白所致的肾小管 上皮细胞损伤，延缓RIF的发生发展的新策略具有重要意义。 2 【关键词】 质纤维化 3 of ofnovelPKC in Effects on isoenzymes urinaryproteinexpression