仙人掌对辐射小鼠bcl-2及p53基因表达影响.docVIP

仙人掌对辐射小鼠bcl-2及p53基因表达影响 　 作者：梁亦龙 舒坤贤 何伟 韦平 查毅 张燕红 韦衍颜 胡娟 【摘要】 　　目的测定仙人掌对辐射小鼠bcl-2与p53基因表达影响。方法以UVB辐照制备损伤模型，预先给予仙人掌，以RT-PCR测定仙人掌对辐射小鼠bcl-2与p53基因表达量的影响。结果仙人掌对辐射小鼠bcl-2的基因表达降低有保护作用，使辐射后p53基因表达降低。结论仙人掌具有一定的防辐射作用。其抗辐射作用与其调控细胞bc1-2与p53基因有关。 【关键词】 仙人掌 辐射 bcl-2基因 p53基因 　　Abstract:ObjectiveTo study the effects of genistein on bone marrow cell cycle，proliferation and expression of bcl-2 gene and p53 gene of normal and irradiated mice.MethodsThe irradiation damage model of the mice caused by UVB was established．The bcl-2 and p53 mRNA gene expression was also determined with the technology of RT-PCR.ResultsOpuntia could increase the bc1-2 gene expression and decrease the p53 gene expression in irradiated mice.ConclusionThe radioprotective effect of Opuntia is related to regulation of cell apoptosis and bc1-2 and p53 gene expression. 　　Key words:Opuntia dillenii; Irradiate; bcl-2 gene; p53 gene 　　仙人掌为仙人掌科(Cataceae)仙人掌属(Opuntia)植物。仙人掌作为药用植物已有悠久历史，具有行气活血、清热解毒功能。国内外对仙人掌的成分及其药理作用进行了较系统的分析。研究表明仙人掌具有降血糖、降血脂、降血压、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、增强免疫力及治疗胃溃疡的作用，本实验研究仙人掌对辐射小鼠血液细胞周期调控基因表达影响。以往研究发现，仙人掌具有较强的抗氧化，能延缓衰老的作用［1,2］。经紫外辐射后对相关细胞的影响是辐射损伤与修复的重要基础。照射后相关细胞凋亡或坏死、细胞周期改变及增殖抑制是辐射损伤发生的主要原因，相关实验研究指出，仙人掌具有较明显的抗氧化性作用，可使血液中SOD活性升高，MDA含量降低［3］。本实验研究仙人掌对辐射小鼠bcl-2，p53基因表达影响，为仙人掌的利用与开发积累相关的资料。 　　1 材料与方法 　　1.1 试剂 　　仙人掌，购于重庆南岸超市，经脱水处理而成并用高速中药打粉机打碎，干燥保存。总RNA 提取试剂盒, 逆转录PCR 反应试剂盒和DL2000 DNA Marker (大连宝生物工程有限公司提供)；β- actin 引物，bcl-2引物，p53引物(上海基康公司合成)。 　　1.2 动物及分组 　　昆明种小鼠，雌雄各半，体重（20±2）g，由重庆中药研究院实验动物科提供。正常对照及阴性对照组各6只,0.2 ml生理盐水灌胃,1次/d；辐射对照组、仙人掌小剂量组和仙人掌大剂量组，每组8只动物。小剂量组和大剂量组的小鼠分别以〔2.5 g/(kg·d)，10.0 g/(kg·d)〕 将仙人掌粉按比例混入基础饲料中，其他两组以等量蒸馏水灌胃，到第7天时，两个剂量组和辐射对照组的小鼠给予全身中波紫外射线照射(UVB，270 nm)，4 h/d，持续7 d后，在无菌条件下分别取股骨骨髓，并制成细胞悬液进行检测。 　　1.3 RT-PCR检测相关基因表达的变化 　　1.3.1 RNA的提取RNA提取和鉴定采用Trizol提取液，按照试剂盒说明书提取骨髓细胞RNA。采用紫外分光光度计, 测定样品在波长260 nm和280 nm的紫外吸收值。根据1 OD260相当于40 g/ml RNA确定RNA的量,根据OD260/OD280 比值判定RNA样品的纯度(OD值为1.8～2.1为宜)。 　　1.3.2 cDNA第一链的合成取一0.5 ml eppendorf管，加入2 μg总RNA， 2 μl oligod(T)，4℃ 8 000 r/min稍离心后，70 ℃水浴5 min，迅速置于冰上冷却，加5×反应缓冲液(M2MLV ) 5 μl，dNT