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仙鱼汤对小鼠Lewis肺癌作用探究 　 作者：曹洋 庞杰 胡艳 李雁 倪晨 陈林香 陈瑶 陈雪馨 谭开基 陈锐深; 【摘要】; 　　【目的】探讨具有健脾清肺、化痰祛瘀作用的中药复方仙鱼汤对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用及其相关的分子机制。【方法】将50只Lewis肺癌荷瘤小鼠分为仙鱼汤高、中、低剂量组（剂量分别为1.747、0.874、0.437g·kg-1·d-1），环磷酰胺（CTX）组（剂量为20mg·kg-1·d-1），荷瘤模型组；计算各组小鼠平均瘤体质量及抑瘤率；制备单细胞悬液，采用流式细胞仪检测各组小鼠Lewis肺癌细胞周期、细胞凋亡率；采用免疫组化法检测各组Lewis肺癌小鼠的bcl2基因的表达。【结果】仙鱼汤高、中、低剂量组及CTX组瘤体质量均低于模型组，肿瘤细胞凋亡率均高于模型组（Ｐ＜０.０５或Ｐ＜０.０１），仙鱼汤各组随着药物剂量的增大，抑瘤率和肿瘤细胞凋亡率逐渐增加。仙鱼汤高、中、低剂量组及CTX组处于S期的细胞比例均低于模型组（Ｐ＜０.０５或Ｐ＜０.０１），呈现明显的G0/G1期阻滞现象。仙鱼汤各剂量组bcl2染色强度指数显著低于模型组（Ｐ＜０.０１）。【结论】仙鱼汤具有抑制小鼠Lewis肺癌生长的作用，其机理可能与通过降低bcl2表达从而促进肿瘤细胞凋亡有关。 【关键词】; 仙鱼汤／药理学 肺肿瘤／中药疗法 细胞凋亡 基因表达调控 细胞培养 　　肺癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤之一，中医药在肺癌的治疗中发挥着越来越重要的作用。仙鱼汤是治疗肺癌的经验方，具有健脾清肺、化痰祛瘀之功效，多年的临床应用已证实其具有较好的临床疗效［1-2］。本研究通过动物实验，进一步研究了仙鱼汤对小鼠Lewis肺癌生长的抑制作用，并从诱导肿瘤细胞凋亡及调控凋亡相关基因的角度探讨其作用机理。现报道如下。 ; 　　1; 材料与方法 　　1.1; 动物; C57BL/6J小鼠，雌雄各半，体质量18～22g，SPF级，由广州中医药大学实验动物中心提供（合格证号：0020535）。 　　1.2; 瘤株; 小鼠Lewis肺癌细胞株由中国医科大学肿瘤研究所提供，广州中医药大学第一附属医院中医肿瘤研究所长期移植传代。 　　1.3; 药物与制备; 仙鱼汤组成：仙鹤草15g，鱼腥草30g，猫爪草30g ，山海螺30g，党参15g，三七片10g，山慈菇10g，浙贝母15g，守宫5g，天冬15g，黄芪30g，炙甘草5g。由广州中医药大学新药研究中心制备，按照传统煎煮法煎煮，低、中、高剂量组药物浓度根据人与动物体表面积与计量换算法计算［3］，低剂量组1.092g/mL，中剂量组2.184g/mL，高剂量组4.368g/mL，分别相当于临床等效剂量的1、2、4倍。制备后于4℃冰箱中贮存备用。环磷酰胺（CTX）注射用粉针剂为山西普德药业有限公司产品（批号，200mg/支，临用前用生理盐水溶解，稀释浓度为2mg/mL，根据CTX的半数致死量（LD50）为472mg/kg，注射用量为LD50的1/3～1/5，故小鼠给药剂量设为20mg·kg-1·d-1。 　　1.4; 主要试剂与仪器; 碘化丙啶（PI）染液为晶美生物工程有限公司产品；bcl2兔多克隆抗体、即用型过氧化物酶免疫组织化学染色（SABC）试剂盒（SA1022）均为博士德生物工程有限公司产品；RPMI1640培养基为Gibco公司产品；二甲苯、乙醇，均为市售分析纯；超净工作台（苏净集团安泰公司）；冷冻桌面离心机（Eppendorf 5810R Centrifuge）；解剖显微镜（北京电子光学设备厂）；37℃电热恒温水浴箱（上海恒丰仪器仪表有限公司）；ALTRA型流式细胞仪（美国Beckman coulter公司）；CSⅣ型烤片机（孝感市电子仪器厂）；亿鸣200病理图像分析系统（中国亿鸣）。 　　1.5; Lewis肺癌荷瘤小鼠模型复制; 于液氮罐中取出Lewis肺癌细胞株1支，置于37℃电热恒温水浴箱内，轻轻摇动令其尽快融化。取出冻存管，用酒精消毒后开启，用吸管吸出细胞悬液，注入离心管并滴加体积分数10％小牛血清RPMI1640培养基，常规离心，制成瘤细胞混悬液，台盼蓝计数约为1×107/mL瘤细胞。消毒小鼠右前腋，取0.2mL（约1×106～2×106个瘤细胞）接种于皮下。传代3次。在无菌条件下剥离Lewis肺癌荷瘤鼠皮下瘤块，选取生长良好的瘤组织，剪碎、称质量，用细胞匀浆器制成匀浆，按体积比1：3加生理盐水制成瘤细胞混悬液，接种于C57BL/6J小鼠右前肢腋窝皮下，每只0.2mL（约1×106～2×106个瘤细胞）。 　　1.6; 分组及给药; 接种24h后随机分为5组:仙鱼汤高剂量组（剂量为1.747g/kg）、仙鱼汤中剂量组（剂量为0.874g/