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何首乌蒸制后结合型蒽醌含量及泻下作用相关性探究 　 作者：赵荣华 赵声兰 毛晓健 解奉江 刘珍珍 【摘要】 目的探讨何首乌高温清蒸后泻下成分与泻下作用的关系，为制订制何首乌的质量标准提供依据。 方法用紫外分光光度法测定何首乌中两种饮片规格（块0.8～1 cm,厚片2～4 mm）蒸制过程中的结合型蒽醌含量,观察小鼠服用两种规格制何首乌饮片的泻下作用。 结果何首乌块（0.8～1 cm）清蒸6 h无泻下作用，结合型蒽醌含量为2.09 mg/g；何首乌厚片（2～4 mm）清蒸4 h无泻下作用，结合型蒽醌含量为2.0 mg/g。结论 何首乌高压蒸制后无泻下作用，结合型蒽醌含量明显降低，可考虑将结合型蒽醌含量作为制何首乌的限定指标。 【关键词】 何首乌 结合型蒽醌 泻下作用 何首乌为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的干燥块根。何首乌生用具有润肠通便的作用，制后有补肝肾、强筋骨、乌须发的作用。何首乌炮制的关键是降低结合型蒽醌的含量，去除泻下的副作用。目前《中国药典》2005年版［1］制何首乌项下仅有二苯乙烯苷的含量测定，而没有结合型蒽醌的含量限定，研究何首乌块(长宽高在0.8～1 cm之间,以下同)和厚片(厚度在2～4 mm之间,以下同) 蒸制后结合型蒽醌含量与泻下作用的关系，可以为制订制何首乌质量标准提供科学依据。 1 仪器与材料 1.1 仪器7520型可见-紫外分光光度计（上海分析仪器厂）。 1.2 药品与试剂对照品大黄素由中国药品生物制品检定所提供（批号0756-200110，含量测定用），所用氯仿、甲醇、硫酸、乙酸镁等试剂均为分析纯试剂，水用纯净水。显色剂用1%乙酸镁甲醇溶液。何首乌药材样品来自云南省绿劝县，经云南中医学院中药鉴定教研室廖心荣教授鉴定为蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb.的块根，人工切成两种大小不同的规格：块0.8～1 cm，厚片2～4 mm。 1.3 动物 昆明种小鼠，18～22 g，购自昆明医学院，雄雌各半。 2 方法与结果 2.1 样品的制备取何首乌块9份，每份200 g，每份用200 ml水浸润，润透后放入高压锅中的竹皿中，120℃蒸制，蒸制时间分别为0.5，1，2，3，4，6，8，10，12 h；取何首乌厚片5份，每份200 g，每份用200 ml水浸润，润透后，放入高压锅中的竹皿中，120℃蒸制，蒸制时间分别为 2，3，4，5，6 h，每一个温度段有3份样品，蒸好后置电热鼓风干燥箱中80℃干燥，至干，含水量为10%，备用。 2.2 受试药物的提取分别取生首乌、 0.8～1 cm块状何首乌清蒸0.5，1，2，3，4，6，8，10 h和2～4 mm厚片何首乌清蒸2，3，4，5，6 h的炮制品各10 g，加入索氏提取器中用甲醇提取12 h，回收甲醇后加纯水溶解至8 ml备用。 　 2.3 结合型蒽醌含量的测定 2.3.1 对照品溶液的制备准确称取大黄素对照品10.40 mg，用甲醇溶解并定容于10 ml容量瓶中，即得浓度为1.04 mg/ml的储备液。取3.00 ml储备液，以甲醇定容于100 ml容量瓶中，即为31.2 μg/ml的对照品溶液。 2.3.2 标准曲线的绘制参照文献［2］乙酸镁显色比色法，选定最大吸收波长为512 nm，样品在显色后15～60 min内吸收度稳定，因而选择在显色15 min后测定。分别吸取大黄素对照溶液2 ml，平行显色后测定，吸光度值RSD = 0.5%（n=5）。分别准确吸取大黄素对照品溶液0.5，1.0 ，3.0，5.0，6.0 ml置于10 ml容量瓶中，各加2.5 ml醋酯镁显色剂，再用甲醇定容并混匀显色。显色后15 min，以显色液为空白，于512 nm处分别测定其吸光度（A），数据回归处理，得回归方程为：A = 41.1 C + 0.009 052，r =0.999 2（n=5），C=mg/ml。 2.3.3 样品溶液的制备精确称取样品约1 g(过60目筛)，置索氏提取器中，加入100 ml氯仿，在沸水浴上回流2 h，经检查游离蒽醌提尽后，回收氯仿液，药渣以100 ml甲醇继续于沸水浴上回流提取结合型蒽醌，约2 h经检查结合型蒽醌提尽后，回收甲醇液，然后加入15%的硫酸溶液40 ml氯仿30 ml，于沸水浴上回流水解约4 h，经检查水解完毕后，水解液置分液漏斗分取氯仿层，上层水相用45 ml氯仿分2次萃取。合并氯仿液，适量纯净水返洗pH至6左右，回收氯仿，残留物用甲醇溶解，转移至10 ml容量瓶中，并用甲醇定容至10 ml，作为结合型蒽醌的供试品溶液。 2.3.4 重复性实验分别精确称取同一样品5份，按上述方法制备供试品溶液，并测定含量，结果显示游离蒽醌含量（mg/g）的