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四神丸化裁治疗溃疡性结肠炎对比性实验探究 　作者：汤菲， 赵海梅 ，潘琦虹 ，刘端勇 ，左志琴 【摘要】 　　目的探讨四神丸化裁前后治疗实验性溃疡性结肠炎的效果及作用机制异同。方法50只小鼠分成5组：即正常组、模型组、四神丸组、加味四神丸组和阳性对照组，采用传统的DSS法复制小鼠溃疡性结肠炎模型，给药10 d后，观察其病理组织学变化，并采用流式细胞术检测其结肠上皮细胞凋亡率，用ELISA测定其外周血PAF及其结肠组织匀浆TNF-α，IL-10，TGF-β表达水平。结果各治疗组结肠指数、结肠损伤评分、病理组织学评分及细胞凋亡率较模型组明显下降（P＜0.01或P＜0.05）。同时四神丸明显升高TGF-β表达水平（P＜0.05），而对TNF-α，IL-10，PAF表达水平作用不明显。而加味四神丸则可显著降低TNF-α及PAF表达、升高TGF-β水平较明显（P＜0.01或P＜0.05），同时，两治疗组之间比较，可见加味四神丸降低TNF-α，PAF表达，升高IL-10水平明显优于四神丸组。结论四神丸和加味四神丸二者均可有效缓解实验性溃疡性结肠炎的炎症损伤，其作用机制的差异性可能在于加味四神丸可以通过抑制血小板活化因子，调节结肠局部促/抗炎因子之间的平衡来实现，而四神丸可能是通过升高TGF-β表达水平，促进上皮损伤后修复，溃疡愈合。 【关键词】 四神丸化裁 溃疡性结肠炎 疗效 机制 溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis, UC)是以直肠、结肠黏膜及黏膜下层的炎症和溃疡形成为病理特点的慢性非特异性肠道疾病［1］。其属于中医”泄泻”“久痢” “肠癖”“滞下”“肠风”“脏毒”等范畴，其病机多认为是以脾肾亏虚为本，以湿热为标，同时也有很多医家认为溃疡性结肠炎反复发作、缠绵难愈，血瘀是UC发病过程中的一个中心环节［2］。因此治疗时常见常用治法和活血化瘀法联合使用，疗效显著［3］。尽管两者都有效，但其作用机制不明。 　　1 材料 　　1.1 动物及分组健康雄性昆明小鼠（南昌大学医学院实验动物中心），雄性，18～22 g，按体重随机分为5组，即正常组、模型组、四神丸组、加味四神丸组、柳氮磺吡啶对照组（阳性对照组）每组10只，适应性饲养3 d后用于实验。 　　1.2 药物和试剂四神丸：由补骨脂，肉豆蔻，五味子，吴茱萸组成；加味四神丸由四神丸加桃仁、红花组成，药物购于江西中医学院附属医院，上药由江西中医学院药剂室制成含药2 g/ml及4 g/ml浸膏剂，4℃冰箱保存备用。柳氮磺吡啶每片0.25 g（上海三维制药有限公司生产，批号：002083）；葡聚糖硫酸钠（DSS）（美国sigma公司，批号：2508-19-2）。TNF-α、IFN-γ、IL-10、TGF-βELISA剂盒均由武汉博士德生物工程有限公司产品，PAF-ELISA检测由南京建成生物工程研究所完成。 　　1.3 仪器酶标仪（Thermo Multiskan MK3）；1575型洗板机（BIO-RAD制造）；BIOFUGE28RS型低温高速离心机（德国HERAEUS制造）；流式细胞仪（美国Coulter公司型号EPICS（XL）。 　　2 方法 　　2.1 造模［4］参考文献并加以改进，采用葡聚糖硫酸钠（DSS）灌胃法制作溃疡性结肠炎（UC）小鼠模型：将5%葡聚糖硫酸钠（DSS）0.8 ml灌胃，1次/d，同时自由饮含2% DSS水，连续7 d。 　　2.2 给药自造模成功次日，按体表面积换算，四神丸组、加味四神丸组分别给予0.2 ml浸膏剂(含生药浓度分别为： 1 g/ml，2 g/ml)灌胃，阳性对照组予柳氮磺吡啶（SASP）混悬液0.2 ml（含药75 mg/ml），正常组及模型对照组均予等容量生理盐水灌胃，1次/d，共10 d。 　　2.3 处理及观察给药10 d后，摘眼球取血，脱颈椎处死大鼠，迅速自肛门2 cm处向上分离结肠6～8 cm，称重后沿肠系膜纵轴剪开，用生理盐水冲洗干净，并将肠黏膜向上平铺于蜡板上固定，观察炎症及溃疡发生情况；根据炎症损伤程度进行结肠组织损伤评分。评分标准［5］：无损伤0分；黏膜充血、水肿、未出现溃疡为1分；黏膜充血、水肿、轻度糜烂、无溃疡为2分；黏膜充血、水肿、中度糜烂、有单个溃疡为3分；黏膜充血、水肿、高度糜烂、有多处溃疡为4分；黏膜充血、水肿、重度糜烂、有1 cm以上溃疡为5分。剪取部分结肠组织，10%福尔马林溶液固定，病理切片，HE染色，光镜下观察溃疡生成情况；部分结肠组织迅速于液氮中保存，待用于检测细胞凋亡水平和细胞因子的表达。病理组织学评分标准［6］：① 受累区域百分率；②滤泡聚集数目；③水肿；④糜烂／溃疡；⑤隐窝丢失；⑥单核、多核细胞浸润。① 和⑤分为5级：0分正常；1分lt;10％ ；2分10％ ；3分10％ ～50％ ；4分