胚胎血红蛋白基因变异及自然流产相关性探究.docVIP

胚胎血红蛋白基因变异及自然流产相关性探究 　摘　要：目的：胚胎发育不全是导致自然流产的主要因素之一。通过检测胚胎血红蛋白α-珠蛋白基因突变情况，探讨血红蛋白基因变异与自然流产的关系。方法：无菌收集自然流产妇女绒毛组织，提取DNA，扩增目的片段，测序，通过序列比对找出突变基因。结果：在胚胎血红蛋白α-珠蛋白的外显子1上检测到点突变HbA1:c.17 C＞A，HbA1:c.46 G＞T，在外显子2上检测到点突变：HbA1:c.223 G＞C。其中，自然流产组的第46个核苷酸的点突变频率与人工流产组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：胚胎血红蛋白α-珠蛋白的外显子1上的点突变可能为致死突变，与自然流产存在一定相关性。 关键词：胚胎血红蛋白；自然流产；基因突变 在28周前妊娠终止，胚胎或胎儿以非人工方式自动脱离母体排除体外，且无生命迹象，胎儿体重在1 000 g以下者，称为自然流产。1988年国家计划生育委员会组织的抽样调查数据分析表明，1976年～1985年我国总自然流产率为3.6%[1]。随着我国社会经济的发展，生育年龄、生活压力及环境污染等因素增加，我国的自然流产率呈上升趋势，已占到妊娠的15%～30%。自然流产会对育龄妇女的生理、心理及家庭带来许多伤害。导致自然流产的因素多种多样，如女性内分泌功能失调、生殖器官疾病、胎盘发育不良、胚胎发育不全等。在这些因素中，胚胎发育不全导致的流产越来越受到广泛重视。胚胎血红蛋白基因异常是常见的导致遗传疾病和流产的因素之一。血红蛋白是由血红素和珠蛋白球结合而成的一种复合变构蛋白，它的主要功能是运输氧和二氧化碳，维持人体内酸碱平衡。胚胎血红蛋白将胎盘氧气从母体向胎盘运输[2]。胚胎血红蛋白异常将导致血氧供应不足，影响胚胎发育甚至流产。由此可见，胚胎血红蛋白在胚胎的正常发育中起着至关重要的作用。近年来，自然流产的发生机制已成为研究的热点。血红蛋白α-珠蛋白基因变异在东南亚一带十分常见，这些突变也是导致非缺失型血红蛋白异常性疾病的主要因素，因此本文对自然流产胎儿血红蛋白α-珠蛋白基因变异进行研究，探讨血红蛋白变异与自然流产的相关性。 1 资料与方法 1.1 一般资料：选取2009年1月～2009年12月在我院妇产科接受人工流产清宫术的女性，无菌收集其绒毛组织50～100 mg。其中，自然流产组40例作为研究组，人工流产组35例作为对照组，两组均为自然受孕。年龄20～35岁，平均28.1岁。月经周期规则，无既往流产使。其中，自然流产组经B超证实为宫内妊娠，胚胎停止发育，胚胎停育时间为孕周6～8周，且排除内分泌，感染等其他原因导致的流产。人工流产组经B超证实为宫内妊娠，胚胎发育良好，孕周为6～8周。自然流产组与人工流产组的年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。 1.2 方法 论文代写 1.2.1 DNA提取、PCR及测序：生理盐水洗去新鲜绒毛组织上的血污，根据QIAGEN公司DNA提取试剂盒操作说明用液氮研磨成匀浆，提取DNA。提取后的DNA用紫外分光光度计测定DNA含量。PCR扩增目的片段，电泳，目的条带割胶纯化，测序。每个样本扩增α1基因目的片段E1～E3，用Primer premier 5设计引物（见表1）。应用Illumina1G analyzer测序仪测序。 表1 用于扩增血红蛋白α1的引物序列 基因 引物 毕业论文 片段长度（bp） Exon 1 5-GGTCCCCACAGACTCAGAGA-3’ 196 毕业论文 5-GTTGAGGGTGGCCTGTGG-3’ 毕业论文 Exon 2 5-AGGCCACCCTCAACCGTCCT-3’ 311 论文代写 5-CCCCTCGACCCAGATCGCT-3’ Exon 3 5’-GGCCTCACTGACCCTCTT-3’ 170 5’-GGGCATGATGTATGGTACCG-3’ 1.2.2 测序结果比对：测序结果通过Clustal W软件进行多序列比对，并结合NCBI的dbSNP数据库确定突变位点的具体位置和突变种类。 1.3 统计学处理：数据采取GraphPadPrism 5.0统计软件进行配对χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 利用两对引物对外显子1扩增、测序后结果显示在血红蛋白α-珠蛋白外显子1上检测到两处碱基突变：HbA1:c.17 C＞A，HbA1:c.46 G＞T（见表2～3）。在血红蛋白α1外显子2上检测到一处碱基突变：HbA1:c.223 G＞C（见表4）。而在血红蛋白α-珠蛋白外显子3上未检测到突变。统计分析发现