胞内S-腺苷同型半胱氨酸升高抑制HUVEC增殖及 ER-α表达关系.docVIP

胞内S-腺苷同型半胱氨酸升高抑制HUVEC增殖及 ER-α表达关系 　【摘要】　　目的探讨S-腺苷同型半胱氨酸（S-adenosylhomocysteine，SAH）升高抑制血管内皮细胞增殖和雌激素受体-α（estrogenreceptor-α，ER-α）基因表达变化的关系。方法以分离的原代人脐静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcell，HUVEC）为研究对象，经不同浓度的SAH水解酶强效抑制剂3-deazaadenosine（DZA）处理24～72h后，反相高效液相色谱法测定胞内SAH浓度，利用细胞计数法、流式细胞仪和TUNEL技术检测细胞的增殖凋亡能力，Westernblot法检测ER-α蛋白的表达，荧光定量-PCR检测其mRNA表达，甲基化特异PCR法检测ER-α基因启动子甲基化状态。结果经DZA处理后，HUVEC胞内SAH浓度升高（P＜0.05），生长增殖能力降低（主要受阻于G1/G0期），凋亡率增加（P＜0.05），ER-αmRNA和蛋白的相对表达量降低（P＜0.05），但DZA处理前后ER-α基因启动子甲基化状态不发生明显改变。结论SAH升高抑制HUVEC的增殖能力与ER-α的表达变化有关，但这种作用不是通过改变ER-α基因启动子的甲基化而实现的。 【关键词】S-腺苷同型半胱氨酸　人脐静脉内皮细胞　雌激素受体-α　甲基化 Abstract：ObjectiveToexploretherelationshipofinhibitedproliferativeabilityinducedbyintracellularS-adenosylhomocysteine(SAH)accumulationandexpressionofestrogenreceptor-α(ER-α)inHUVEC.MethodsAfterisolatedprimaryHUVECtreatedwithout(normal)orwith3-deazaadenosine(DZA),apotentS-adenosylhomocysteinehydrolaseinhibitor,for24-72h,intracellularSAHlevelwasmeasuredwithreversedphasehigh-performanceliquidchromatography(RP-HPLC).TheproliferativeabilityofHUVECwasdetectedwithcytometry,flowcytometryandTUNELmethods.TheexpressionofER-αproteinandmRNAwasdeterminedwithWesternblotandquantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(qRT-PCR)techniques,respectively.ThepromotermethylationofER-αgenewasanalyzedwithmethylationspecificPCR(MSP).ResultsTheresultsshowedthatthelevelofintracellularSAHwasincreasedinHUVECincubatedwithDZAcomparedtonormal.TheproliferativeabilityofHUVECweredecreasedandtheapoptoticratewasincreasedaftertreatmentwithDZA(P＜0.05).TherelativeexpressionofER-αmRNAandproteininHUVECtreatedwithDZAwaslowerthanthatofnormal(P＜0.05).ButtherewerenoobviouschangesofER-αgenepromotermethylationinHUVECbeforeandaftertreatmentwithDZA.ConclusionsThesefindingssuggestedthattheinhibitedproliferativeabilityinducedbyintracellularincreasedSAHwascorrelativewithER-αexpressioninHUVEC.Thisactionwasnotrelatedwithitspromotermethylatedpatterns. Keywords:S-adenosylhomocysteine;humanumbilicalveinendothelialcells;estrogen