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脱水休眠小卷蛾斯氏线虫生化特性探究 　关键字：昆虫病　线虫 　　昆虫病原线虫是生物防治的重要作用物，但由于不耐干燥和高温，限制了其应用范围。因休眠线虫具有抵抗不良环境的能力(Glazer1983)，通过胁迫昆虫病原线虫脱水休眠，可提高其对外界环境的抗性，由过去低温存储运输方式变为常温存储运输，进而降低成本，扩大应用范围。至今为止胁迫线虫脱水休眠的方法有蒸发胁迫和高渗液胁迫两种(Womersley1990;陈松笔，1998)。通过这两种方法使线虫体内水分逐渐脱出，从而降低细胞中原生质的水分含量，使线虫代谢强度逐渐减弱而进入休眠状态。然而体内水分脱去多少，线虫才进入休眠，尚未见报导。 　　线虫脱水休眠除与水分有关以外，还与体内脂肪、脂肪酸、海藻糖和糖元的含量相关。蒸发胁迫脱水休眠后，线虫耗氧量减少，体内脂肪含量升高(Bird1980)，但也有人提出异议，Madin(1975)认为燕麦真滑刃线虫Aphelenchusavenae(Bastian)经蒸发胁迫缓慢脱水过程中体内脂肪含量降低，海藻糖含量上升。Womersley(1990)也指出未处理的小卷蛾斯氏线虫Steinernemacarpocapsae(All)侵染斯线虫脂类和糖元含量约占干重的30%和4%，然在RH97%处理3d之后，脂类和糖元含量分别变为24%和0；相反海藻糖含量在未处理前少于干重的0.2%，脱水后增加到7%，脂肪酸相对含量也由处理前的13.2%降低到4.4%。不同线虫在脱水休眠过程中海藻糖和糖元含量也存在差异，蒸发胁迫脱水休眠的小麦粒瘿线虫Anguinatritici(Steinbuch)和起绒草茎线虫Ditylenchusdipsaci(Kühn)体内优先贮存海藻糖，而不是糖原，Paragrellusredivivus和Turbatrixaceti却含有大量的糖元，海藻糖含量极微，食菌茎线虫Ditylenchusmyceliophagus(Goodey)含有少量的糖元和极微量的海藻糖(Womersley1982)。虽然线虫脱水休眠后，体内脂肪、脂肪酸和糖含量均有变化，但海藻糖在脱水休眠中起的作用却大些，因为海藻糖在脱水休眠前有保护膜系统的潜力，根据对模型膜系统的研究得出一定数量海藻糖(0.3g海藻糖/g膜)的出现能防止结构水丢失时，膦脂双分子层变形，从而保持膜结构和功能的完整性(Crowe1984;Crowe’1984;Womersley’1986)。 　　采用高渗液胁迫线虫脱水休眠比之蒸发胁迫方法，快速、安全，此法简单、适用，能为生产提供大量的休眠线虫，为常温贮存、长途运输和应用提供保证。是胁迫线虫脱水休眠的较佳方法，但对此法得出脱水休眠线虫体内脂肪、脂肪酸、糖的情况尚未了解。本文通过采用高渗液胁迫小卷蛾斯氏线虫脱水休眠，研究其生化特性，对揭示高渗液胁迫线虫脱水休眠的机制起到一定的促进作用。 　　1　材料和方法 　　1.1　大蜡螟幼虫和斯氏线虫BJ品系 　　大蜡螟(GalleriamellonellaL.)幼虫为室内饲养。小卷蛾斯氏线虫BJ品系的繁殖采用Dutky(1964)的大蜡螟活体繁殖法。 　　1.2　脱水休眠小卷蛾线虫的制备 　　在250mL的三角瓶里，配制SB高渗液20mL，投入小卷蛾斯氏线虫BJ品系约2.5×106条，在10h内胁迫线虫逐渐脱水休眠。 　　1.3　脱水休眠线虫含水量的测定 　　取约107条脱水休眠线虫BJ品系，真空抽滤，除去线虫表面的高渗液，转到已经称重的坩埚中，在Sartorius电子天平上称得线虫的鲜重(W1)；然后在台式干燥箱内(70℃，48h)烘干直至恒重，称重，除去坩埚重量，即为休眠线虫干重(W2)，重复3次。用未处理线虫为对照(华东师范大学生物系植物生理教研组，1980)。 　　1.4　脱水休眠线虫粗脂肪的测定 　　采用索氏提取法测定休眠线虫粗脂肪的百分含量(朱俭，1981)，用未处理线虫作对照。 　　1.5　脱水休眠线虫酯酶活性的测定 　　测定脱水休眠线虫的酯酶活性参照吴振廷(1988)方法。脱水休眠线虫106条经真空抽滤，在-18℃冰箱中冷冻5min，再转到0℃冰槽的玻璃研钵中研磨2min后，加入1mLpH为7.4的0.2mol/L磷酸缓冲液，又研磨2min，研磨毕加进此缓冲液1mL，再将研磨液转入容量为4mL的指形离心管内，0℃下以5000r/min转速离心10min，吸出上清液，立即放在0℃冰箱保存备用。 　　在长指形管中均加入10mL0.01mol/L的乙酸α-萘酯溶液，加入3mL蒸馏水稀释，分别加进线虫酶液50μL以未处理线虫作对照，用50μl重蒸水代替酶液做空白对照调零，振荡5min后，立即加入5滴坚牢兰RR盐显色剂显色，在紫外/可见分光光度计上于600nm处测