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蒲公英多糖脱色方法探究 　 作者：陈静， 杨晓杰， 程加春， 李学花 【摘要】 　　目的研究蒲公英多糖的脱色方法。方法采用过氧化氢和壳聚糖两种脱色方法对蒲公英多糖进行脱色。结果过氧化氢脱色的最佳条件为过氧化氢用量25%、温度60℃、时间3 h、pH值9.0；壳聚糖脱色的最佳条件为壳聚糖用量5%、温度25℃、pH值5.1。结论两种方法都能有效的去除蒲公英多糖溶液中的色素。 【关键词】 蒲公英多糖 脱色 过氧化氢 壳聚糖 　　蒲公英Taraxacum officinale是菊科舌状花亚科多年生草本植物，叶可食用，全草均可入药，有清热解毒、止痛散淤等功效，是中医临床上常用的中草药。多糖对细胞免疫和体液免疫功能具有良好的促进作用；具有抗肿瘤、抗辐射、抗突变、抗炎症、抗溃疡、抗感染、抗衰老、抗疲劳等作用［1］。然而在多糖的制备过程中，醇沉后的多糖常含有色素，脱色直接影响到产品的质量和色泽，因此寻找合适的脱色条件是提高蒲公英多糖质量的关键。壳聚糖目前在中药分离和澄清精制中有广泛的应用。本实验研究发现壳聚糖能够有效地去除蒲公英多糖中的色素。本研究以蒲公英花为原料，通过正交优化过氧化氢和壳聚糖两种脱色方法，以期为蒲公英多糖的提取、分离及其质量提高提供有效的途径。 　　1 材料与仪器 　　1.1 材料蒲公英，采自黑龙江省五大连池市；壳聚糖，济南海得贝海洋生物公司；30%过氧化氢；无水乙醇。 　　1.2 仪器水浴锅；752N紫外可见分光光度计；旋转蒸发仪；TGL-16G型高速离心机。 　　2 方法 　　2.1 蒲公英粗多糖的制备蒲公英粗多糖的制备采用参考文献［2］的方法进行。 　　2.2 多糖含量的测定本试验中采用蒽酮-浓硫酸法测定多糖［3］，以葡萄糖为标准品。 　　2.3 蒲公英多糖的脱色 　　2.3.1 工艺流程粗多糖→称重→复溶→加入脱色剂→脱色→测定吸光度和多糖含量。 　　2.3.2 脱色率的测定方法用752N紫外可见分光光度计在色素的最大吸收波长处测其吸光度值［4］。得到蒲公英粗多糖溶液的最大吸收值为460 nm, 故选460 nm为测定波长。 　　脱色率(%)=(脱色前吸光度-脱色后吸光度)/脱色前吸光度×100% 　　2.3.3 过氧化氢脱色条件的优选影响过氧化氢脱色的因素很多,参考杨大伟等［1］实验结果,选取过氧化氢的用量、脱色温度、脱色时间、pH值，按L9(34)进行设计正交实验。因素设计水平见表1。称取0.2 g蒲公英花多糖溶解于400 ml的蒸馏水中溶解，按正交试验方案进行脱色。脱色液经离心后测定脱色率和多糖含量,以二者作为衡量脱色效率的指标。 　　2.3.4 壳聚糖脱色条件的优选 　　1%壳聚糖的配制［5］:称取1 g壳聚糖加入1 ml的冰乙酸加水溶解定容至100 ml，85℃保温45 min，备用。 　　壳聚糖脱色步骤：称取0.2 g蒲公英花多糖溶解于400 ml的蒸馏水中溶解，按正交方案加入不同体积的壳聚糖，搅拌20 min，静止40 min、离心，测定脱色率和多糖含量。 　　　壳聚糖澄清作用受它的用量、絮凝温度、pH值等的影响。在单因素实验的基础上，选取壳聚糖的用量、絮凝温度、pH值3个单因素按L9(34)进行设计正交实验。因素设计水平见表2。 　　表1 过氧化氢脱色试验因素水平（略） 　　表2 壳聚糖脱色试验因素水平（略） 　　 　　2.3.5 数据处理数据处理采用加权评分法［6］。评分标准为:将各项指标除以该列最大值再乘以100，为该项得分。设定多糖脱色率(x)和多糖含量(y) 两者的权重系数均为0.5,对两项指标进行加权求和。通过公式z=0.5x+0.5y,得到综合评分(z)。 　　3 结果 　　3.1 过氧化氢正交实验过氧化氢脱色效果见表3。 　　表3 过氧化氢脱色正交实验结果及分析（略） 　　以综合评分为指标，由表2可知过氧化氢脱色的因素大小排列顺序为：Cgt;Bgt;Dgt;A，即时间是主要的影响因素，其次是温度和pH值，过氧化氢的用量的影响最小。分析表明，其最优结果是A1B3C3D3，即过氧化氢的用量是多糖体积的25%、温度60℃、时间是3 h、pH值是9.0。 　　3.2 壳聚糖正交实验壳聚糖脱色效果见表4。 　　表4 壳聚糖正交实验与分析（略） 　　以综合评分为指标，由表4可知壳聚糖脱色的因素大小排列顺序为：Agt;Cgt;B，即壳聚糖的用量是主要的影响因素，其次是pH值，温度影响最小。分析表明，其最优结果是A3B1C3，即壳聚糖用量是多糖体积的5%、温度是25℃、pH值是5.1。 　　4 讨论 　　通过正交实验对蒲公英花多糖的脱色条件进行优化，研究发现,对0.2 g的蒲公英花粗多糖采用过氧化氢进行脱色, 在温度60℃，过氧化氢的用量是多糖体积的25%时，时间3 h，pH值9.0的