不同龄大鼠胃酸、胃内细菌及胃肠道感染相关探究.docVIP

不同龄大鼠胃酸、胃内细菌及胃肠道感染相关探究 　【摘要】 目的 研究不同鼠龄大鼠胃内pH值的变化与胃部细菌的关系，观察胃内细菌变化是否能导致大鼠胃肠道的炎症反应。方法 Wistar大鼠30只，其中3月龄的非老龄大鼠20只，22月龄的老龄大鼠10只，分为非老龄奥美拉唑组、非老龄对照组和老龄组。2 w后测大鼠胃内pH值，取大鼠胃组织做细菌培养，观察大鼠是否有腹泻，并做胃组织病理切片检查。结果 与非老龄对照组大鼠相比，老龄组大鼠胃内pH值、胃部细菌数量无明显差异(P＞0.05)；非老龄奥美拉唑组大鼠胃内pH值、胃部细菌数量差异明显(P＜0.01)。3组大鼠实验期间未发现明显的腹泻，观察病理切片，胃组织无明显炎细胞浸润。结论 胃内pH值与胃部细菌数量不随鼠龄的增加而变化。随胃内pH值升高，大鼠胃部细菌数量增加，但未发生明显的胃肠道炎症。 【关键词】 大鼠；胃酸；细菌过度生长；胃肠道炎症；衰老 正常人胃液的pH值为1.5～2.0，可以杀死随食物进入胃内的细菌，通常正常人的胃内可以分离出少量细菌，主要是来源于口腔和食物的过路菌，含量一般在103 CFU/ml以下〔1〕 。胃酸状态对细菌在胃内的生存非常重要。目前临床上常用的抑制胃酸的药物包括组胺H2受体阻滞剂及质子泵抑制剂（PPI），其中PPI可使胃内pH值明显增高，这样有可能造成胃内细菌过度生长，而胃内细菌过度生长是否能引起胃肠道的炎症呢？ 本研究从动物实验着手，研究大鼠胃内pH值与胃部细菌数量的关系，并研究衰老对胃酸及胃部细菌的影响，观察胃内细菌的繁殖是否能引起胃肠道的炎症。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 主要仪器 　　电热恒温培养箱，重庆四达公司。电子天平，上海精天电子仪器厂。Olympus BH2 显微镜，日本Olympus公司。 　　1.1.2 主要试剂 　　广泛及精密pH值试纸，北京化工厂。奥美拉唑镁肠溶片MUPS，阿斯利康制药有限公司。一次性血琼脂培养基，天津市金章科技开发有限公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 实验对象 　　30只Wistar大鼠（解放军总医院动物实验中心提供），其中20只3月龄，体重251.4～310.9 g，随机分2组：非老龄对照组10只，非老龄奥美拉唑组10只；另有老龄组10只，22月龄，体重402.4～820.7 g。组内大鼠雌雄各半。 　　1.2.2 用药方法 　　奥美拉唑肠溶片分散于蒸馏水中，浓度为0.75 mg/ml，分散后于30 min内灌胃。非老龄奥美拉唑组以奥美拉唑灌胃，2 ml/100 g体重，每天2次(15 mg·kg-1·d-1)，非老龄对照及老龄组均以等量的生理盐水灌胃。3组的灌胃时间均为2 w。在2 w内观察各组大鼠是否出现腹泻情况。 　　1.2.3 胃液pH值测定 　　2 w后，非老龄奥美拉唑组和非老龄对照组、老龄组大鼠均禁食24 h，禁水12 h。之后用10%水合氯醛(约2 ml/kg)腹腔注射麻醉，在严格的无菌条件下剖腹并游离胃，用止血钳夹住贲门和幽门。于前胃区剪一小切口，用无菌注射器抽出约1 ml胃液，用广泛pH试纸及精密pH试纸测出胃液pH值。 　　1.2.4 留取标本 　　取前胃及后胃组织各一块，放入已称量好的无菌Eppendorf管中，电子天平称重，置500 μl生理盐水中；另取后胃组织一块，浸泡于4%的甲醛溶液中。 　　1.2.5 细菌培养 　　把胃组织在无菌研磨器中研成匀浆，根据不同的胃液pH值取1、10或100 μl组织研磨液接种于普通血平板，在37℃培养箱中需氧培养24 h观察结果。计数细菌的菌落数，细菌计数单位为CFU/g。 　　1.2.6 病理观察 　　取出固定于多聚甲醛的胃组织，按常规脱水、石蜡包埋，4 μm切片，HE染色,由有经验的病理科医生在显微镜下观察炎细胞浸润情况。 　　1.3 统计学分析 　　用SPSS15.0统计软件。细菌计数变换为自然对数，组间资料t检验、成组资料秩和检验。 　　2 结 果 　　2.1 胃内pH值变化与细菌过度生长 　　与非老龄对照组大鼠相比，老龄对照组大鼠胃内pH、胃部细菌数量均无明显差异(P＞0.05)。与非老龄对照组大鼠相比，非老龄奥美拉唑组胃内pH、胃部细菌数量均有明显差异(P＜0.01)。见表1。表1 胃内pH值变化对胃部细菌数量的影响(略) 　　　2.2 大鼠胃肠道炎症的观察 　　3组大鼠在2 w的实验期间均未发生明显的腹泻。观察3组的HE染色片，发现胃组织均无明显淋巴细胞及粒细胞浸润。见图1。 　　3 讨 论 胃酸正常分泌对维持胃肠道内生态环境的稳定、实现正常生理功能有很重要的作用。胃酸由于生理或病理原因减少，则可发生胃内细菌过度生长。PPI是强力抑制胃酸分泌的药物，因此，可以引起胃内细菌过度生长〔2〕 。 本实验表明，