冷冻稀释液中添加抗氧化剂对猪精液冷冻保存效果的影响.pdfVIP

l刖吾 1．1哺乳动物精液冷冻保存研究概况 抑制精子新陈代谢水平，将精液经过一系列特殊处理后，长期保存在超低温的状态下， 达到延长精子寿命的目的，是随着人工授精(artificial 应用而发展起来的--17技术。人工授精是家畜生产和育种的一项最有成效的常规技 术，可以加速品种改良，减少饲养种畜的头数而降低配种成本，避免因引进新种猪所 带来的疾病问题。随着人工授精技术的发展，哺乳动物精液冷冻保存技术研究随之开 展起来。冷冻精液不仅可以解决鲜精所不能解决的远途运输问题，促进不同区域优良 种质资源的交流，使精液的应用不受地域的限制，而且可以延长种公猪遗传物质的使 用时间，在保留和恢复精液供应、更新血统、引种、降低生产成本等方面都有重要意 义。牛、羊、马等家畜精液冷冻技术的研究开展较早，并且目前许多国家已建立了相 当规模的精子库【l】’其冻精已经广泛应用于生产实践。近年来，国内外对许多野生动 物精液冷冻研究较为成功【2翔。但是，由于猪精液自身的冷冻特点，其冷冻精液在解 冻后活力低，精予损伤严重，冻精授精后受胎率远远不及鲜精，至今猪精液的冷冻保 存还处于研究阶段。所以，深入研究猪精液冷冻损伤机理，优化猪精液冷冻程序，改 善稀释液成分以提高猪精液冷冻保存效果，使其尽快应用于生产实践，对促进猪繁殖 育种、普及人工授精及保护濒危动物种质资源等方面都有重要意义Ⅳ】。 1．2猪精液冷冻的研究历史和现状 1．2．1猪精液冷冻研究简史 多年的历史，而冷冻获得成功是近五、六十年的事情。猪的精液冷冻研究自1949年英 将猪冻精经子宫颈输入，并产下仔猪。1970年以前的研究中，基本上利用牛精液冷冻 方法冷冻猪精液，解冻后的精子具有活力但没有受精能力。虽然也有猪冻精成功受孕 的报道，但其结果不能被重复。1970年Polge等证明，猪冷冻精液妊娠率低的主要原 因是精子运动力下降，在雌性生殖道内运输不利，因而经输卵管输精效果较好【引。随 颈输精并成功分娩的冻精技术试验结果，证明了低温保存后猪精子仍具有受精能力。 精，48 h后剖检11头，有5头受孕。25-30d后剖检另外12头，有lO头怀孕【13】。从此打 开猪冷冻精液的商品化之路。美国、英国、加拿大的冻精还作为商品出口。但目前全 世界冻精的应用估计还不到猪人工授精总量的1％【141，在生产上的应用没有其它家畜 冻精的使用广泛与普遍。其主要原因是猪的多胎性，使用冻精其受胎率、产仔率等主 要经济指标低于鲜精受胎率及自然交配的产仔率【蛳。因此，目前国内外研究者致力于 猪冷冻精液操作程序的优化以及应用。 1．2．2猪精液冷冻研究现状 由于猪精子对低温十分敏感，在低于15C时死亡特别快，即使快速降温部分精子 也会迅速死亡，而且冻精解冻后的精子存活率还不到50％E16切，即便是活精子，其受 精率下降以及解冻后存活时间的减少【18】，使得人工授精后的繁殖率都非常低。目前研 究的主要目的是提高猪冷冻精液解冻后活力和受精能力，减少冷冻精液与鲜精之间的 差距。研究方向主要集中在猪精液冷冻解冻温度与速率、冷冻保护剂、冷冻剂型及稀 释液成分等方面，其最终目的都是为了提高冷冻．解冻后猪精液的受精率。 在最早的研究中，猪的精液采用玻璃瓶或玻璃试管与较高浓度的甘油溶液进行冷 冻保存。后来，研究中发现了比较简便的颗粒冻精，接着为了方便精液冷冻开始研究 细管冻精，并且试验证明颗粒和细管冷冻后精液的受精率无显著差异[191。江中良研 究发现颗粒冻精与0．5 ml细管冻精在冻后活率与复苏率之间有差异，但差异不显著(P 0．05)【驯。0．25ml、0．5 ml小型细管和平管，有较大的表面积，容量比，是适合低温 ml ml细管、2．8 分别为66．3％和74．8％12q：Wongtawan等(2006)将猪精液分别用O．5 多聚平管(4个0．7 ml平管组成)冷冻，结果冻后精子存活率分别为42．8％、44．3％[221。 用O．25ml法国进口细管冷冻猪精液，置液氮上方3 min，一120℃左 cm处熏蒸约10 右投入液氮保存